水泡状胎块与水肿性流产患者印记基因P57kip2检测分析

廖旭慧 宋 云 (浙江丽水市人民医院 323000)

水泡状胎块(HM)是最常见的妊娠滋养细胞疾病，根据肉眼检查、显微镜下特点及染色体核型分析和临床表现不同，分为完全性水泡状胎块(CHM)和部分性水泡状胎块(PHM)[1]。临床上单纯依靠病理组织学难以区分一些不典型病例。本研究采用免疫组织化学检测CHM、PHM及水肿性流产(HA)组织中P57kip2的表达情况，以探讨P57kip2在HM的诊断分型及临床意义。

1 对象与方法

1.1 对象 收集本院2003年1月至2008年12月经病理确诊CHM 30例、PHM 30例、HA 15例，均为首次清宫标本，孕龄为6～16周，年龄22～37岁，平均29岁。取正常早期妊娠绒毛组织20例作为对照组。

1.2 试剂与方法 鼠抗人单克隆抗体P57kip2和Elivision检测试剂盒均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。免疫组化采用Elivision法，常规设阳性对照和阴性对照，用已知阳性片作阳性对照，以TBS代替一抗作阴性对照。所有标本经10%甲醛溶液固定，石蜡包埋切片，经二甲苯脱蜡、梯度酒精脱水、柠檬酸缓冲液高压抗原修复、3%H2O2封闭过氧化物酶。滴加鼠抗人P57kip2单克隆抗体工作液室温孵育60min,PBS液冲洗3次，再滴加酶标抗鼠/兔聚合物，室温孵育30min，室温下DAB显色，自来水冲洗，复染，脱水透明，封片。

1.3 结果判定 P57kip2蛋白阳性定位于细胞核，以细胞核出现棕黄色的颗粒为阳性，阳性细胞<5%为(-)，5%～24%为(+)，25%～49%(++)，>75%(+++)。

2 结果

2.1 P57kip2蛋白在CHM、PHM、HA、正常绒毛中的表达情况(表1) P57kip2在CHM中存在表达分布的细胞有特异性，CHM高度水肿的绒毛间质细胞和细胞滋养层细胞P57kip2表达几乎阴性，绒毛外滋养细胞团细胞散在阳性。PHM水肿的绒毛间质细胞和细胞滋养层细胞P57kip2表达阳性。HA组织中绒毛间质细胞、细胞滋养层细胞和绒毛外的滋养细胞团细胞P57kip2均阳性表达。早孕正常绒毛的表达与HA相似。四种类型的合体滋养层细胞P57kip2均阴性。可见，P57kip2在CHM与其他三种类型的胎盘比较，细胞滋养层细胞和绒毛间质细胞表达有显著差异，而绒毛外滋养细胞团和合体滋养层细胞无明显差别。

表1 P57kip2蛋白在CHM、PHM、HA、正常绒毛中的表达情况

2.2 CHM、PHM、HA细胞滋养层细胞和绒毛间质细胞中的P57kip2表达(表2) CHM与PHM、HA三种组织类型细胞滋养层细胞和绒毛间质细胞P57kip2基因表达阳性率比较差异有统计学意义(χ2＝52.32，P<0.01)。

表2 CHM、PHM、HA细胞滋养层细胞和绒毛间质细胞中的P57kip2表达 [例(%)]

3 讨论

水泡状胎块是一组良性妊娠滋养细胞疾病，但是有一定的恶变倾向，完全性水泡状胎块的恶变率约20%，部分性水泡状胎块为1%～10%[2]。有关文献报道侵袭性葡萄胎主要来自完全性水泡状胎块，罕见来自部分性水泡状胎块[3]。尽管有病理组织学诊断与鉴别诊断标准，但当送检标本的临床和病理特征不明显时，诊断较为困难，特别是处于妊娠6～9周之间的早期CHM，常常被误诊为水肿性流产。近年来，国内外学者运用分子及细胞遗传学技术，为水泡状胎块的分类、发病机制和临床预后评估提供了更客观、科学的诊断方法。基因组印记被认为在HM的形成中起关键作用[4]。CHM形成机制是空卵受精，不含母体核的DNA，核型为46XX，均为纯合子，为二倍体，滋养层细胞核只含父系的染色体[5]，父体DNA过多引起胚胎外过度生长和分化，结果导致滋养细胞的显著增生。PHM染色体组成为三倍体（69，XXX或69，XXY），一个来自母体，另两个来自父本单倍体，为正常卵子的双精子受精[6]。

P57kip2是细胞周期抑制因子和肿瘤抑制因子。此基因是母源等位基因表达，父源等位基因的表达印记被抑制而不表达。CHM均由父系DNA产生，无母系DNA，P57kip2不表达；PHM由一个母源性DNA和两个父源性DNA构成，表达P57kip2。Fukunaga[7]研究发现，P57kip2在正常早孕绒毛的细胞滋养层及绒毛间质细胞中高表达，而DNA完全来自父方的CHM不表达或极少表达；DNA来自父母双方的PHM的表达类似正常绒毛。P57kip2抗体单克隆可以在石蜡切片中表达，染色阳性定位胞核。我们运用免疫组化方法，研究结果显示，P57kip2在CHM中几乎阴性表达，而在PHM和HA中为强阳性表达。

综上所述，P57kip2基因的免疫组化分析有助于水泡状胎块的诊断分类，辅助临床正确治疗及判断预后。

[1] 杨红华.葡萄胎的临床病理观察[J].中国妇幼保健，2005，20（专刊）：688.

[2] 曹泽毅.中华妇产科学[M].北京:人民卫生出版社，2004:2272-2299，2305-2306.

[3]Shen DH, Khoo US, Ngan HY,et al.Coexisting epithelioid trophoblastic tumor and choriocarcinoma of the uterus following a chemoresistant hydatidiform mole[J]. Arch Pathol Lab Med, 2003, 127: 291-293.

[4]Li HW,Tsao SW,Cheung AN.Current understangdings of the molecular gentational trophoblastic diseases[J].Placenta 2002,23:20-31.

[5]Fulop V,Mok SC,Gati I,et al.Recent advances in molecular biology of gestational trophoblastic disease.A review[J]. J Reprod Med, 2002,47:369-379.

[6]Watanabe M, Ghazizadeh M, Konishi H, et al. Interphase cytogenetic and AgNOR analyses of hydatidiform moles[J].J Clin Pathol, 1998, 51(6):438-443.

[7]Fukunaga M. Immunohistochem icalcharacterization of P57kip2 expression in early hydatidiform moles[J]. Hum Pathol,2002,33:1188-1192.