Fbgβ455基因多态性与CRP协同作用对动脉粥样硬化的影响

孙晓盈,王 海,高 申,谢 风

(吉林大学中日联谊医院,吉林长春 130033)

Fbgβ455基因多态性与CRP协同作用对动脉粥样硬化的影响

孙晓盈,王 海,高 申,谢 风*

(吉林大学中日联谊医院,吉林长春 130033)

目的研究血浆纤维蛋白原Fbgβ455基因多态性与此反应蛋白CRP的协同作用对动脉粥样硬化的影响。方法采用限制性长度多态性聚合酶链反应检测血浆Fbgβ455基因态性及免疫比浊法检测CRP。结果心肌梗塞组与冠心病组患者外周血基因组DNAFbgβ455多态性分布G/G,G/A,A/A具有显著性差异(P＜0.05);心肌梗塞组与冠心病组中血浆高敏CRP与Fbgβ455多态性分布无显著相关性(P＞0.05)。结论血浆Fbgβ455等位基因型G/A,A/A可能是急性心肌梗塞发病的遗传性危险因素,Fbgβ455与CRP在动脉硬化的发生过程中无协同作用。

纤维蛋白原;C反应蛋白;限制性长度聚合酶链反应;基因多态性

(Chin J Lab Diagn,2010,14:1449)

目前研究已证实在急性心肌梗塞或脑梗塞的患者中血浆纤维蛋白原及C反应蛋白的浓度显著高于正常水平。但从基因水平上分析冠状动脉粥样硬化的发生时二者的基因多态性是否具有协同作用,

目前尚无报道,本文作以下研究。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验对象 心肌梗塞血清标本收集2006年10月-2007年8月吉林大学中日联谊医院心内科,急诊科等72例,其中男39例,平均年龄58岁;女33例,平均年龄62岁。诊断符合WHO心肌梗塞的诊断标准。对照组冠心病血清标本收集2006年10月-2007年2月吉林大学中日联谊医院心内科78例,其中男43例,平均年龄61岁,女35例,平均年龄65岁。诊断符合WHO冠心病的诊断标准,部分经冠状动脉造影证实。

1.1.2 主要试剂 全血基因组DNA提取试剂盒、PCR扩增试剂盒及HaeⅢ限制性内切酶(大连宝生物工程有限公司、引物(上海生工生物工程技术服务有限公司)

1.2 方法 采用分子生物学技术——限制性长度多态性聚合酶链反应。

1.2.1 标本收集及处理

取静脉血(2%EDTA抗凝)2 ml用于提取白细胞做基因检测,枸橼酸钠抗凝血7 ml用于检测血浆Fbg。

1.2.2 外周血基因组DNA提取

1.2.3 PCR扩增DNA

Fbg 引 物 设 计:上 游:5′-GGAATGCAATCTCTGCTACCT-3′

下游 :5′-TGTCGTTGACACCTTGGGAC-3′

1.2.4 HaeⅢ限制性内切酶酶切

1.2.5 1%琼脂糖凝胶电泳

1.3 统计学分析 采用统计软件SPSS11.5分析,其中两组(心肌梗死组与对照组)Fbgβ455G/A基因频率及等位基因频率分布进行 χ2检验。

2 结果

2.1 Fbgβ455G/A多态性分布图

图1 Fbgβ455G/A多态性分布

图1中显示从左向右第一条带是异常突变杂合子G/A型;第二条带为正常基因G/G型;第三条带为异常突变纯合子A/A型;第四条带为未经酶切的Fbgβ455基因 ;M 为 maker。

2.2 心肌梗塞组与冠心病组患者外周血基因组DNAFbgβ455多态性分布

心肌梗塞组与冠心病组患者外周血基因组DNAFbgβ455多态性分布G/G,G/A,A/A具有显著性差异(P＜0.05),两组G和A等位基因频率均有显著性差异,P＜0.05,见表1。

2.3 心肌梗塞组与冠心病组Fbgβ455多态性分布与血浆高敏CRP浓度的关系

心肌梗塞组与冠心病组中血浆高敏CRP与Fbgβ455多态性分布无显著相关性(P＞0.05),且心肌梗死患者血浆高敏CRP浓度明显高于对照组(P＜0.005)。(见表2)

表2 心肌梗塞组与冠心病组Fbgβ455多态性分布与血浆高敏CRP浓度的关系

3 讨论

目前发现β纤维蛋白原455G/A基因多态性表现为455G/G,455G/A,455A/A三种基因型,且G/A或A/A基因型的个体血浆纤维蛋白原水平明显高于G/G,A/A和G/A基因型个体的缺血性心脑血管疾病发生率明显高于G/G型个体[1]。长期以来CRP被当作感染与炎症的经典指标[2]。细胞因子尤其是由肝细胞和激活的巨噬细胞分泌的白细胞介素-6(IL-6),在斑块破裂和血栓形成中也起着重要的作用,白细胞介素-6可诱导CRP和纤维蛋白原的分泌。在心肌梗塞等动脉硬化时刺激肝细胞刺激因子白细胞介素-6(IL-6)产生增多,而IL-6主要促进肝细胞合成分泌Fbg,导致血浆Fbg水平的增高[3]。CRP是Fbg的一种趋化因子,Fbg又使巨噬细胞粘附到内皮表面从而移植到内膜。CRP趋化单核细胞,单核细胞诱导组织因子的产生而促进凝血过程。又因为Fbgβ-455G/A位点邻近IL-6反应区域,与该位点连锁的基因位点Fbgβ-148也位于IL-6反应区域附近,它的变异可通过IL-6介导使Fbg表达增加。从理论上讲二者在动脉硬化发生时应具有协同作用,但本实验中心肌梗塞组Fbgβ-455多态性分布与CRP无相关性,原因一方面可能是血清CRP水平受自身CRP基因多态性调控,且IL-6基因变异也会影响CRP释放入血;另一方面,标本量较少也是影响本实验结果的重要原因。以上问题还有待于今后进一步探讨。

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[2]Kim YJ,Shin YO,Bae JS,et al.Beneficial effects of cardiac rehabilitation and exercise after percutaneous coronary intervention on hsCRP and inflammatory cytokines in CAD patients[J].European journal of physiology,2008,455(6):1081.

[3]Dorsch MF,Barrett JA,Lawrance R A,et al.Premature coronary artery disease shows no evidence of linkage to loci encoding for tissue inhibitors of matrix metallopro2 teinases[J].J Hum Genet,2003,48(10):508.

The relationship between fibrinogen,polymorphismβ-455G/A,hs-CRP and artherosclerosis

SUN Xiao-ying,WANG Hai,GAO Shen,et al.(China-Japan Union Hospital of Jilin University,Changchun130033,China)

ObjectiveTo investigate the relationship between gene frequency 、allele frequency of Fgβ455G/A and pathological change degree of myocardial infarction(MI)、blood plasma Fg、CRP.MethodsAdopt molecular biology restricted length polymorphism reaction and observe results by agarose gelelectro There is no significant difference between CRP and polymorphism of DNAFgβ455in bothgroupMI andCHD(P＞0.05)phoresis under extreme ultraviolet lamp.Test the level of Fg and CRP by coagulogram analysator ACL900 and beckman autoanalyser.ResultsThere is significant difference on polymorphism of DNAFgβ455 G/G,G/A,A/A、allele frequency of G and A between two groups(P＜0.05).ConclusionAllelotype G/A,A/A of Fgβ455 is probably heritage risk factor of AMI;The level of Fg is affected by polymorphism of Fgβ455;3 the high sensitive CRP is not affected by polymorphism of Fgβ455.

fibrinogen;C reactive protein;Restricted length polymorphism reaction;polymorphism of gene

R541.4

A

1007-4287(2010)09-1449-02

吉林省科委资助项目

*通讯作者

2009-12-02)