高效液相色谱法测定单硝酸异山梨酯注射液中两种有关物质

2010-08-046607济南军区药剂研究中心姜海云莫宗琪

中国疗养医学 2010年2期

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250100 山东恒瑞医药开发有限公司肖广常3

单硝酸异山梨酯是硝酸异山梨酯的活性代谢产物，为临床上常用的治疗心绞痛的药物。本试验研究了单硝酸异山梨酯注射液中硝酸异山梨酯和2-单硝酸异山梨酯两种有关物质，为其注射液在配制、运输及储藏过程中的质量控制提供依据。

1 仪器与试药

Labaliiance高效液相色谱仪 (美国)，Anastar色谱数据工作站。单硝酸异山梨酯注射液(自制)，单硝酸异山梨酯对照品(自制，以无水物计为99.9%)，2-单硝酸异山梨酯(Fisher Scientific Inc.美国，含量99.9%)，硝酸异山梨酯(中国药品生物制品检定所)，甲醇(色谱纯)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适应性用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(C18柱，4.6 mm×150 mm，5μm)；进样量：20 μL。流动相：水∶甲醇=75∶25；流速：1 mL/min。检测波长为210 nm。理论塔板数按单硝酸异山梨酯计算应不低于3 000。

2.2 检测波长的选择对硝酸异山梨酯和2-单硝酸异山梨酯两种有关物质的水溶液分别进行紫外扫描，结果显示两种物质在远紫外区(近200 nm处)有逐渐增大的吸收，结合高效液相色谱的分析特点，故选用210 nm作为吸收波长。

2.3 破坏性试验本品经热、酸、碱、氧化等破坏，各破坏条件下色谱峰的分离度均大于1.5。

2.4 线性试验精密称取硝酸异山梨酯、2-单硝酸异山梨酯对照品(以无水物计)用流动相溶解并依次稀释成2、4、5、6、10 μg/mL的浓度，分别取20 μL进样，以浓度与峰面积作线性回归，曲线方程为：硝酸异山梨酯：C=0.144 53A＋5.402 2×10-5，r=0.999 5；2-单硝酸异山梨酯：C=0.023 95A＋9.502 2×10-5，r=0.999 8。

2.5 精密度试验取硝酸异山梨酯、2-单硝酸异山梨酯5 μg/mL浓度的溶液，连续进样6次，结果分别为RSD=1.2%，RSD＝0.8%。

2.6 最低检测限用流动相配制不同浓度的硝酸异山梨酯和2-单硝酸异山梨酯的溶液，分别取20 μL进样，记录色谱图，以信噪比为3，计算硝酸异山梨酯、2-单硝酸异山梨酯的检测限分别为1 ng、0.5 ng。

2.7 有关物质测定取本品适量2 mL，加水制成每1 mL含单硝酸异山梨酯1 mg的溶液，作为供试品溶液；另精密称取硝酸异山梨酯对照品与2-单硝酸异山梨酯对照品适量，以流动相稀释制成每1 mL中含硝酸异山梨酯、2-单硝酸异山梨酯5 μg的溶液(1)、(2)，作为对照品溶液。取对照品溶液(2)注入液相色谱仪进行预试验，调节检验灵敏度，使主成分的峰高约为记录满量程的20%～25%。再取供试品溶液与对照品溶液(1)、(2)注入高效液相色谱仪，记录供试品色谱图，供试品溶液中如有硝酸异山梨酯与2-单硝酸异山梨酯峰，其各自的峰面积，均不得大于对照品溶液(1)、(2)色谱图上的主成分峰面积，结果(表1)。