高效液相色谱法测定酮康唑乳膏中酮康唑含量

李 霞，李 继，张秉华，刘海静

（陕西省食品药品检验所，陕西 西安 710061）

2005年版《中国药典（二部）》采用紫外分光光度（UV）法测定酮康唑乳膏含量[1]802，样品处理采用0.1 mol/L的盐酸水浴加热提取后用氯仿反复萃取的方法。也有人采用加内标高效液相色谱（HPLC）法测定酮康唑乳膏中酮康唑含量[2-3]。按照国家药典委员会2010年版药典标准提高工作要求，我所共收集了11个不同生产厂家的样品，根据厂家反映，2005年版《中国药典（二部）》的含量测定方法操作较复杂、费时，且损失较大。笔者在试验过程中也发现，由于各个厂家生产工艺存在较大差异，有些厂家的样品在用0.1 mol/L的盐酸水浴加热提取后非常难以过滤，且样品损失较大，方法重现性较差。因此，笔者采用HPLC法对该品种进行了含量测定，并简化了样品前处理方法，结果准确可靠，方法操作简单、重现性好、专属性强。

1 仪器与试药

Waters Alliance HT液相色谱仪，包括Waters 2487型检测器；Mettler AE 240型电子天平。乙酸铵、二异丙胺为分析纯；甲醇为色谱纯；水为超纯水；酮康唑对照品（中国药品生物制品检定所，批号为0294-9801）；酮康唑乳膏样品11批，由11个生产厂家提供。

2 方法与结果

2.1 色谱条件及系统适用性试验

色谱柱：Capcell PAK C18柱（150 mm ×4.6 mm，5μm）；流动相：0.5%醋酸铵溶液-0.2%二异丙铵的甲醇溶液（23∶77）；流速：1.0 mL/min；检测波长：240 nm；进样量：10μL。在此条件下，色谱图见图1，酮康唑峰的保留时间为5.3 min，理论塔板数为4082，拖尾因子为1.1。

2.2 溶液制备

取酮康唑对照品0.5011 g，精密称定，置50 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液，备用。取样品2.5 g，精密称定，置烧杯中，加甲醇-氯仿（1∶1）20 mL，置80℃水浴中振摇使溶解，加甲醇-氯仿（1∶1）适量，移至50 mL量瓶中，放冷至室温，用甲醇-氯仿（1∶1）定容至刻度，摇匀，冰浴中冷却1 h待基质析出后放至室温，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

2.3 方法学考察

耐用性试验：选用了3种品牌的色谱柱进行试验，分别为Capcell PAK C18柱 （150 mm ×4.6 mm，5μm），Diamonsil（钻石）C18柱（150 mm×4.6 mm，5μm）和 Agela Technologies C18柱（150 mm×4.6 mm，5μm）。结果酮康唑的峰形均良好，理论塔板数均在2000以上，说明该系统的耐用性较好。

专属性试验：取空白试剂溶液及阴性对照品溶液，照2.1项下的色谱条件进行测定。结果处方中所用辅料及配制样品所用溶剂对测定结果均无干扰，说明该方法的专属性较好（见图1）。

图1 高效液相色谱图

线性关系考察：精密吸取2.2项下对照品贮备液，用溶剂逐级稀释，即得系列质量浓度的对照品溶液，依法各进样2次，以峰面积为纵坐标、质量浓度（mg/mL）为横坐标进行线性回归。回归方程为Y=2 ×107X+143661（r=0.9999），线性范围为 0.1 ～2.0 mg/mL。

加样回收试验：精密称取样品（厦门金日制药有限公司，批号为060501）1.25 g，分别精密加入对照品贮备液（10.022 mg/mL）1.5，2.5，3.5 mL，照供试品溶液配制方法制备，每种浓度各配制3份，依法测定。结果见表1。

表1 酮康唑加样回收试验结果（n=3）

精密度试验：取对照品溶液（质量浓度为1 mg/mL），依法测定酮康唑的峰面积。结果的 RSD为0.3%（n=6），表明方法的精密度良好。

最小检测限确定：取一定质量浓度的对照品溶液逐级稀释、进样。结果按3倍信噪比计算，酮康唑的最小检测限为0.2μg/mL。

最小定量限测定：取一定质量浓度的对照品溶液逐级稀释、进样。结果按10倍信噪比计算，酮康唑的最小定量限为1.0μg/mL。

重现性试验：取同一批号（厦门金日制药有限公司，批号为060501）样品6份，依法测定。结果酮康唑平均含量为101.1%，RSD 为 1.6%（n=6）。

稳定性试验：同一供试品溶液，分别于24 h内每隔2 h进样测定。结果酮康唑含量的 RSD为0.4%（n=13），表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。

2.4 样品含量测定

取11个厂家各1批样品，依法测定含量，同时将新起草的标准和原标准进行了比较，结果见表2。

表2 样品含量测定结果（%，n=3）

3 讨论

样品前处理：文献[2]采用四氢呋喃作为溶剂将乳膏分散后用甲醇稀释样品。笔者在试验中发现部分厂家的样品加四氢呋喃后乳膏无法分散或溶解。根据文献[1]，酮康唑原料在氯仿中易溶、在甲醇中溶解，结合多次试验，最终选择氯仿-甲醇（1∶1）为提取溶剂，采用80℃水浴溶解并定容后，冰浴1 h后过滤，能有效提取酮康唑和去除基质。结果发现采用新方法所测酮康唑含量比原方法有所提高，且方法操作简单，回收率、精密度等都较好。

色谱条件确定：曾参考文献[1]436，采用甲醇-水为流动相进行含量测定，但结果发现只有使用Capcell PAK C18柱（150 mm×4.6 mm，5μm）时，酮康唑的峰形较好，理论塔板数超过2000，而采用Diamonsil（钻石）C18柱和Agela Technologies C18柱时酮康唑的峰形都较差，理论塔板数根本达不到2000，说明该流动相的系统耐用性较差，不适合该样品的含量测定；参照文献[4-5]，采用0.5%的醋酸铵溶液-甲醇（23∶77）为流动相，发现酮康唑峰形有拖尾现象，而在甲醇中加入一定量的二异丙胺后，拖尾现象明显减轻。最终选择0.5%的醋酸铵溶液-0.2%的二异丙胺的甲醇溶液（23∶77）为流动相，以上述3种型号的柱子为固定相，峰形均较好，理论塔板数均超过2000；且适当改变流动相比例、柱温及流速，除酮康唑的保留时间有少许变动外，峰形均较好。最终确定了上述色谱条件。

检测波长选择：参照文献[4-5]酮康唑片剂和洗剂的质量标准，选择240 nm为检测波长，此时溶剂及辅料均无干扰。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（二部）[M].北京：化学工业出版社，2005.

[2]杨 欣，屈平定，绳金房.HPLC法测定酮康唑乳膏中酮康唑含量[J].中国抗生素杂志，2004，29（7）：401-402.

[3]李文东，庞青云，余 立，等.HPLC法测定酮康唑乳膏中酮康唑含量[J].中国药品标准，2007，8（1）：36-38.

[4]WS1-（X-422）-2003Z，国家食品药品监督管理局国家药品标准新药转正标准[S].

[5]WS1-（X-515）-2003Z，国家食品药品监督管理局国家药品标准新药转正标准[S].