环孢素A单克隆全血试剂盒残余试剂再利用研究

郑芝欣，翟保同，周 成

（河南省南阳市中心医院，河南南阳 473001）

环孢素A是目前临床常用的强效免疫抑制剂，广泛用于器官移植术后抗排异反应和某些自身免疫性疾病的治疗[1]。由于在治疗剂量下，其生物利用度和药动学个体差异很大，治疗中进行血药浓度监测及药动学和药效学研究，对提高移植器官的存活率、减少毒性反应和排异反应的发生具有重要的临床意义[2-3]。环孢素A的血药浓度监测方法有高效液相色谱法（HPLC）、放射免疫法（RIA）、荧光偏振免疫法（FPIA）等[4-5]。FPIA因方法快捷、灵敏可靠、重现性好而被临床广泛采用。在利用FPIA对环孢素A进行血药浓度监测过程中，主要依赖于环孢素A试剂盒，由于目前国内尚无技术生产该试剂盒，试剂盒的供应还依赖于进口，价格较为昂贵，是环孢素A血药浓度监测的最主要耗材，也是造成临床上环孢素A血药浓度监测成本和费用较高的主要原因。在环孢素A的实际血药浓度监测中，每套试剂盒利用100次左右时就不能再用，而试剂盒中仍残余不少试剂，扔掉极为可惜。为探讨如何利用这些残余试剂，降低临床监测成本，笔者进行了该项研究。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

TDX/FLX全自动快速血药浓度测定仪，高速离心机，TDX单克隆全血浓度标准曲线盒（批号93258Q100），质控盒（批号 03071Q100），标准试剂盒（批号 13107Q102），混合试剂盒（批号13107Q100的残余试剂与批号17774Q101的残余试剂进行混合）；以上均为美国ABBOTT公司产品。

1.2 样品来源

2007年6～9月在我院进行环孢素A血药浓度监测的20例肾移植患者，年龄20～60岁，手术时间6个月～5年，均同时于9∶00服药前抽取血样，分别用标准试剂盒和混合试剂盒进行环孢素A血药谷浓度测定。

1.3 方法

所有样品均在同一上午测定。标准试剂盒测定：用微量移液器精密吸取150 μl混匀后的全血样品，置于离心管中，精密加50 μl红细胞溶解剂，再精密加300 μl沉淀剂，在涡旋混合器上充分混匀，高速离心后将上清液全部倒入样品杯中用标准试剂盒进行测定。混合试剂盒测定：用微量移液器精密吸取168 μl混匀后的全血样品，置于离心管中，精密加50 μl红细胞溶解剂，再精密加 282 μl沉淀剂，在涡旋混合器上充分混匀，高速离心后将上清液全部倒入样品杯中用混合试剂盒进行测定。所有操作均严格按照操作规程进行，微量移液器使用也严格按照说明书要求进行。

2 结果

2.1 两试剂盒的质控结果比较

质控标准分三档，分别为高（680～920 ng/ml）、中（340～460 ng/ml）、低（120～180 ng/ml），两试剂盒质控均符合标准要求，但混合试剂盒高、中、低质控值均比目标浓度低约12%。见表1。

表1 两试剂盒质控结果（ng/ml）Tab.1 The results of control in two reagent packs(ng/ml)

2.2 两试剂盒测定结果比较

标准试剂盒测定结果（X）＞混合试剂盒测定结果（Y）的样品数为11个，X＜Y的样品数为9个，同一样品最大差距为7.26 ng/ml，最小差距为0.44 ng/ml，两组数据经配对t检验，无显著性差异（P＞0.05）。 见表 2。

表2 两试剂盒测定结果统计学分析（n=20）Tab.2 The statistic analysis of the results in two reagent packs(n=20)

2.3 两试剂盒测定结果相关性分析

以标准试剂盒测定结果为X，混合试剂盒测定结果为Y进行线性回归分析，得回归方程为：Y=-1.9380+1.0058X，r=0.9994（n=20）。

3 讨论

由表1可以看出，标准试剂盒高、中、低质控结果与目标浓度吻合较好，说明测定所用标准曲线液、试剂、质控液均较稳定，对测定结果影响较小；而混合试剂盒高、中、低质控结果虽然也在要求范围之内，但3个质控结果均比目标浓度低约12%，说明两个残余试剂盒混合后也很稳定，但与标准试剂盒相比存在一定的偏差，而偏差方向一致，存在一定的系统误差，为使测定结果更加准确，在利用混合试剂盒测定样品时笔者对每个样品均比常规抽取量（150 μl）多抽取12%（18 μl），而对沉淀剂比常规抽取量（300 μl）少抽取 18 μl，每份样品混合后总量仍为500 μl。

结果表明，利用标准试剂盒对标准抽取量的样品进行测定结果与利用混合试剂盒对经过调整抽取量的样品测定结果吻合非常好，统计学处理显示无显著性差异，相关性分析显示相关性较强，说明采取该种方案可行。据此，我们在实际操作中可以根据每套残余试剂混合后与标准质控存在的偏差比例，对抽取的样品量作出适当调整，使测定结果更加准确，更能反映真实的血药浓度。由于机器内部设定操作次数限制和试剂盒中残余试剂液面较低，每套环孢素A试剂盒用到100次左右就无法再用，而每套试剂盒中残余的试剂经与另一套残余试剂混合后至少还可操作15～20次，可节约成本2000～3000元，经济效益非常明显。

[1]陈耿,董家鸿.环孢素A治疗药物监测的研究进展[J].第三军医大学学报,2003,25(6):551-554.

[2]李金恒.临床治疗药物监测的方法和应用[M].北京:人民卫生出版社,2003:102-103.

[3]魏筱华,刘通,刘明珪,等.肾移植术后CsA血药浓度监测及其临床意义[J].江西医药,2003,38(6):414-416.

[4]缪海均,邓渝林,恽芸蕾,等.不同免疫分析仪在环孢素A血药浓度监测中的差异[J].中国医院药学杂志,2004,24(4):223.

[5]刘文豹,刘杰,刘增.FPIA、RIA在环孢素A血药浓度监测中的对比分析[J].放射免疫学杂志,2008,21(5):423.