陈皮不同提取工艺橙皮苷提取率分析

蔡庆顺， 钟小群， 余 华

(1.江西省妇幼保健院，江西南昌330006;2.江西省药物研究所，江西南昌330029)

陈皮为芸香科植物橘Citrμs reticμlata Blanco及其栽培变种的干燥熟果皮［1］。富含挥发油如α-侧柏烯、α-三茚烯、辛醛、α-水芹烯等，含量达1.5% ～2.0%。另还含橙皮苷，新橙皮苷、柑橘素、右旋柠檬烯、枸橼醛麝香草酚、β-谷甾醇、对羟福林及其它3种黄酮等成分。具有理气健脾，燥湿化痰的功效。用于胸脘胀满，食少吐泻，咳嗽痰多等症。其提取工艺一般为提取挥发油后再水煎煮、直接水煎煮、乙醇回流或渗漉等方法，一般用中国药典的检测成分橙皮苷为指标对提取工艺进行优化。作者亦以橙皮苷为指标对陈皮进行系统的提取工艺研究，结果发现用上述工艺提取药材，橙皮苷的提取率均比较低，大部分的橙皮苷依然残留在陈皮药渣中;对其中的水提取工艺进行了过程监控，发现各过程中橙皮苷的提取率很低，大部分还残留在药渣里;作者分析了2005年后发表的多篇相关文献资料，发现有标准的相关中成药中橙皮苷最大提取率为从3%至30%，显示用橙皮苷为指标成分来控制中成药质量有不妥之处。

1 仪器与试药

仪器:高效液相色谱仪(大连依利特P200Ⅱ.高压恒流泵;大连依利特UV200Ⅱ紫外可变波长检测器;千谱色谱工作站)。色谱柱:Hypersil BDS C18柱(4.6 mm×200 mm，大连依利特)。

对照品:橙皮苷(购买于中国药品生物制品鉴定所。供含量测定用，编号为110721-200512)。陈皮药材:购于本省南华医药公司。试剂:流动相所用溶剂为色谱纯，其它试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 检测方法 系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇-醋酸-水(30∶4∶66)为流动相;检测波长为284 nm。理论板数按橙皮苷峰计算应不低于2000。

对照品溶液的制备 精密称取橙皮苷对照品适量，加甲醇制成每1 mL含40 μg的溶液，摇匀，即得。

供试品溶液的制备 取相当生药材0.1～1.5 g的供试品粉末或供试品溶液，精密称定(或量取)。粉末置圆底烧瓶中，精密加入甲醇100 mL，密塞，称定重量，加热回流30 min，放冷，密塞，精密称定重量，用甲醇补足减失的重量，滤过，弃去初滤液，收集续滤液，即得;溶液至100 mL量瓶中，加甲醇至刻度，滤过，弃去初滤液，收集续滤液，即得。

测定法 分别精密吸取上述对照品溶液与供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，测定，即得。

2.2 标准曲线的制备 精密称橙皮苷对照品适量，用甲醇制成每1 mL中401.76 μg对照品溶液。从对照品溶液中吸取 0.25、0.5、1.0、1.5、2、10 mL 量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得系列对照品溶液。分别吸取上述对照品系列溶液各10 μL，在相同色谱条件下测定峰面积，以峰面积为纵坐标，对照品进样量为横坐标，绘制标准曲线并计算回归方程。结果回归方程为:y=1216247.201x+5731.9，r=0.9996，说明橙皮苷进样量在0.1004～0.8035 μg范围内线性关系较好。

2.3 供试品的制备

2.3.1 不同提取工艺提取的供试品制备 取经过检验合格的陈皮生药材500 g若干份。采用如下工艺进行提取，平行2份。工艺1:水煎煮法(12倍水煎煮2 h，3次，滤过，合并滤液，浓缩至4000 mL，备用);工艺2:提取挥发油法(加8倍水提取挥发油5 h后，滤出药液，药渣再加12倍水煎煮2 h，2次，滤过，合并滤液，浓缩至4000 mL，备用);工艺3:70%乙醇回流法(12倍70%乙醇回流2 h，3次，滤过，合并滤液，浓缩至4000 mL，备用);工艺4:70%乙醇渗漉法(药材粉碎成粗粉，加70%乙醇浸泡24 h后渗漉，收集渗漉液至滤液几乎无色，约20倍生药量，回收乙醇，浓缩至4000 mL)，依上述法进行橙皮苷含量测定，并分别计算转移率。结果见表1。分别收集各药渣，烘干，粉碎称定重量，依上述法进行橙皮苷含量测定，并分别计算残留率，结果见表2。

表1 陈皮药材不同提取工艺含量测定结果(n=2)

表2 陈皮药材不同提取工艺后药渣中的橙皮苷含量测定结果(n=2)

2.3.2 水提取工艺各过程样品的制备 取经过检验合格的 陈皮生药材500 g，加12倍水煎煮2 h，3次，滤过，滤液分别浓缩至4000 mL，2000 mL、1500 mL，分别取出50 mL备用;药渣烘干，粉碎成细粉，称定重量;除备用外的滤液合并(相当药材490 g)，浓缩至500 mL时，加乙醇调含醇量为50%，放置24 h，滤过，沉淀烘干，粉碎，称定重量(45.5 g);上清醇液1500 mL，取20 mL备用，余下醇液，回收乙醇后浓缩得清膏(相对密度为1.20，60℃)，减压干燥，粉碎成细粉，称定重量(120.2 g)，将上述的各个样品溶液、药渣粉末、沉淀粉末、浸膏粉末依法测定橙皮苷含量，记录HPLC色谱图，结果见表3。

表3 陈皮水提醇沉工艺中各过程的含量测定结果

结果显示:水煎煮第1次、与第2次、第3次的提取率几乎相似为6%左右，3次总的提取率为18.94%，而药渣中的橙皮苷含量依然达到69.097 mg/g，相当于80.83%的橙皮苷还残留在药渣里，说明陈皮药材的提取工艺单纯以橙皮苷含量为检测指标是不合适的。

2.4 对2005年后发表的一些文献资料进行分析处理，以药典规定陈皮的橙皮苷最低含量为3.5%计，计算了含陈皮中成药橙皮苷最大提取率，结果发现最大提取率从3.65%至31.78%，还有一些不可信的数据，说明流通中的相关中成药橙皮苷含量限度参差不齐，橙皮苷作为控制药品质量的指标是不妥的。结果见表4。

3 讨论

3.1 本文采用的HPLC法测定橙皮苷含量，是参照中国药典2005年版一部陈皮项下的方法，流动相做了适当调整，对照品浓度及供试品浓度是原标准的十分之一左右，目的是使样品在能达到有效分离，峰型好。标准曲线研究也显示橙皮苷进样量在0.1004～0.8035 μg范围内线性关系较好。

3.2 各提取工艺是常规工艺，亦为中成药制备中常采用的方法。不同工艺含量测定结果显示:用常规工艺，常规溶剂及常规用量很难将橙皮苷从陈皮药材中提取出来，用橙皮苷作为指标来指示陈皮的提取过程作者认为不妥。

表4 一些含陈皮药材的中成药橙皮苷含量测定结果

3.3 水提取工艺的过程监控及HPLC图显示:橙皮苷与其相邻未知峰的比例(以峰高之比来表示)不是恒定的:药材比例最大，第1次的提取物中比例最小，第2次提取物比例较第1次大，第3次提取物较第2次大，在药渣中的比例最大，说明橙皮苷提取率不及其相邻成分。

3.4 文献资料中的一些相关中成药橙皮苷含量结果分析显示:最大提取率为3.65%至31.78%，结果相差比较大。作者认为陈皮为价格便宜的常用药材，橙皮苷含量还都比较高，都会足量投料，但是成品中的橙皮苷含量的确不会很高，成品质量的好坏不能以橙皮苷含量高低来确定。

［1］中国药典［S］.一部.2005，132.

［2］傅 军，陈晓颖，李焕丹，等.保和口服液中橙皮苷的HPLC测定［J］.中药材，2005，28(12):1115-1116.

［3］蒋 平，王文清，王 晨.高效液相色谱法测定保和口服液中橙皮苷含量［J］.中国医院药学杂志，2005，25(8):780-781.

［4］钱星文，何 雁，罗晓健，等.高效液相色谱法测定藿香正气制剂中橙皮苷的含量［J］.江西中医学院学报，2005，13(3):38-39.

［5］祝德秋，罗启剑，崔 岚.舒胆颗粒的研制与质量控制［J］.中国药师，2005，8(3):206-208.

［5］苏健俊，丁 野.妇科白带片中橙皮苷的含量测定［J］.中国药业，2005，14(11):34-35.

［7］段 瑞.高效液相色谱法测定四季感冒片中橙皮苷含量［J］.辽宁中医杂志，2006，33(3):356.

［8］金 阳.反相高效液相色谱法测定解痉镇痛酊中橙皮苷的含量［J］.时珍国医国药，2007，4(4):37-40.

［9］张月辉，王冬梅，王安达，等.HPLC法同时测定益胃口服液中芍药苷和橙皮苷的含量［J］.沈阳药科大学学报，2007，8(8):495-498.

［10］李 方，张清波，张孝晨.高效液相色谱法测定止嗽片中橙皮苷的含量［J］.中医药学报，2007，35(5):37-40.

［11］朴春香，金东日，张善玉.HPLC法测定金果饮咽喉片中橙皮苷的含量［J］.中国医药导报，2007，4(23):86-87.