碱性氧化法消除维生素C对Trinder’s指示反应系统的干扰作用

李 娜 秦 俭 辛克学 山东省即墨市即墨人民医院检验科（266200）

Trinder’s指示反应作为显色指示系统，广泛应用于胆固醇（CHO）、葡萄糖（GLU）、甘油三酯（TG）、尿酸（UA）等的测定。维生素 C（以下简称VC）可以竞争H2O2而干扰测定结果，出现无法解释的偏低甚至根本测不出。我们根据VC分子结构中烯二醇基在空气中易被氧化成二酮基，从而失去其还原性并在碱性溶液中更快的特点，对标本进行预处理，使VC氧化。即使标本中VC含量达5.68 mmol/L，并不干扰Trinder’s指示反应系统。与高铁络合剂法比较VC干扰能力提高3倍多。

1 材料与方法

1.1 材料 ①0.10 mol/L NaOH，0.10 mol/L HCl，维生素C（分析纯），北京化工厂产品；②胆固醇（CHOD-PAP），甘油三酯（GPO-PAP），葡萄糖（GOD-PAP ），尿酸（UA-PAP）测定试剂盒均为北京九强生物技术有限公司产品；③硫酸铁铵（分析纯），天津化学试剂厂产品；④仪器：日本OLYMPUS全自动生化分析仪。

1.2 方法 含高 VC 血清 100 µl，加入 0.10 mol/L NaOH100 µl，混匀，置37℃水浴30分钟，再加入0.10 mol/L HCl 100 µl，混匀，标准液和质控物均同样预处理，上机测定.结果最后乘以稀释倍数3。

2 结果

2.1 最适碱浓度选择 取无明显溶血和黄疸的血清，按常规方法测定其CHO、TG.、GLU、UA。然后准确配置成含VC 5.68mmol/L的样本，配制不同浓度的碱和盐酸，除 37℃水浴时间为 20分钟外，其余条件均同碱性氧化法测定，各种浓度的碱分别以相同浓度的盐酸中和。

2.2 最适碱性氧化时间的选择 取上述含VC5.68mmol/L的样本，选择不同的碱性氧化时间测定其GLU.结果37℃水浴30分钟即可完全消除5.68 mmol/L VC的干扰作用。

2.3 对比实验 取20份血清各取出部分制成含VC5.68 mmol/L的样本，按设计的碱性氧化法测定之，再将加VC前、后各20份血清标本按常规法测定。结果见表1。

表1 对比实验结果（n=20 ，±s ， mmol/L）

表1 对比实验结果（n=20 ，±s ， mmol/L）

项目 碱性氧化法 常规方法加5.68mmol/L VC组 加vc前组 加5.68mmol/L VC组CHO 4.669±0.8354.628±0.8060.122±0.328 TG 1.725±0.6601.749±0.6310.000±0.000 GLU 5.556±1.2625.525±1.2560.777±0.969 UA 0.330±0.0530.325±0.0540.193±0.035

三组结果进行配对t检验。加VC前常规法测定组与加VC后碱性氧化法测定组比较，CHO、TG.、GLU、UA，均无显著性差异（P＞0.05）。加VC后常规法测定组与另二组比较，CHO、TG.、GLU、UA，均相差非常显著（P＜0.01）。

2.4 碱性氧化法与高铁络合剂法抗 VC干扰能力的比较 制备含 VC 5.68 mmol/L的血清样本。常规法测定加VC前、后的CHO、TG.、GLU、UA，再按上述碱性氧化法测定加 VC后的样本。然后参照李学仁方法[2]。结果见表2。

表2 碱性氧化法与高铁络合剂法抗VC干扰能力的比较结果（mmol/L）

3 讨论

VC是一种六碳多羟基内酯，不但具有较乙酸更强的酸性，而且还是很强的还原剂，可以竞争 H2O2而干扰 Trinder’s指示反应系统 。李学仁[1]证实当VC含量达4.54 mmol/L时，ABTS、4-AA-酚显色体系均不显色，干扰率达100%。对4-AA-HDBS显色系干扰率也高达95.1%。我门实验的结果显示：TG为5.19 mmol/L血清标本可被5.68 mmol/LVC完全抑制。5.68mmol/LVC对CHO. GLU.UA（均采用Trinder’s指示反应系统）测定产生的负误差分别为：（4.50±0.48）mmol/L，（4.75±0.29）mmol/L，（132±20）mmol/L因此当标本真值低于VC所致相应负误差时，表现为完全抑制；而当标本真值高于 VC所致相应负误差时，表现为不完全抑制。前者易被操作者发现，而后者当血清中 VC含量少或血清测定真值较高于正常人时易被操作者忽视，多在临床医师或病人提出疑问时才被发现。这种情况应予重视。

NaOH浓度至关重要。实验发现，UA的最适浓度为0.11 mol/L，CHO、TG.、GLU的最适NaOH浓度均为0.12 mol/L，在最适碱性条件下，37℃水浴仅需20分钟即可完全消除5.68 mmol/L VC的干扰。但作为调整反应体系pH的HCL浓度较高时，易致蛋白析出。

[1]李学仁,刘荔,任凤琴,等.丙酮酸氧化酶法测定血清丙氨酸氨基转移酶[J].中华医学检验杂志,1994,17(1):148.

[2]李学仁.还原物对过氧化物酶氧化还原反应的干扰及消除抗坏血酸的探讨[J].中华医学检验杂志,1992,15:323.