高效液相色谱法测定正柴胡饮颗粒中芍药苷的含量

李 霞，韩曼雪，董卫红，娄 敏，李荣生

(中国中医科学院实验药厂，北京 100700)

正柴胡饮颗粒是由柴胡、赤芍、生姜等6味中药组成，具有表散风寒，解热止痛的功效。本法主要对方中赤芍中所含有效成分芍药苷的含量测定。关于芍药苷的含量测定，文献已有报道，主要为比色法、薄层层析——紫外分光光度法[1]、薄层扫描法[2]、高效液相色谱法[3]等等。我们针对正柴胡饮颗粒，通过提取溶媒及其浓度、提取方法及超声处理时间的选择，选用了目前常用的高效液相色谱法，测定正柴胡饮颗粒中芍药苷的含量，方法简便，灵敏、准确、重复性好。

1 仪器与试药

岛津 LC-10AD高效液相色谱仪，岛津 SPD-10AVP紫外检测器，N-2000数据工作站。CSF-1A超声波清洗发生器:(工作频率33kHz，输出超声电功率250W)。芍药苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号0736-9811)试剂除甲醇为色谱醇外，其余均为分析纯，水为重蒸馏水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:十八烷基硅烷键合硅胶C18柱(250mm×4.6mm，5μm);流动相:甲醇-异丙醇-36% 乙酸-水(25∶2∶2∶71);流速 1.0ml/min，检测波长 230nm;灵敏度:0.1AUFS;柱温:室温。进样量:10μl。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取芍药苷对照品适量，加50%乙醇制成每1ml含芍药苷0.1mg的溶液，摇匀即得。

2.3 样品的测定

表1显示，取本品约0.5g，研细，精密称定，置50ml量瓶中，加50%乙醇适量，超声处理30min，放置至室温，加50%乙醇稀释至刻度，摇匀、滤过即得。用0.45μm的微孔滤膜过滤，进样10μl，用外标法计算含量。

表1 样品测定结果

2.4 标准曲线的绘制

表2显示，精密吸取对照品溶液(0.1mg/ml)5、10、15、20、25μl，按上述色谱条件测定峰面积。以峰面积积分值为纵坐标Y，芍药苷含量为横坐标X，绘制标准曲线，回归方程为:Y=－14.4629+1.034×103X，r=0.99997，表明芍药苷在 0.5μg～2.5μg范围内线性关系良好。

表2 线性关系考察结果

2.5 精密度试验

表3显示，精密吸取供试品溶液(001110)，重复进样5次，芍药苷峰面积积分值相对标准偏差<2%。

表3 精密度实验结果

2.6 重复性实验

表4显示，按照2.3含量测定项下进行，取同一批样品(001110)制备5份供试品溶液进行测定，计算相对标准偏差为1.06%。

表4 重复性实验结果

2.7 稳定性实验

表5显示，按照2.3含量测定项下方法，对同一批样品(001110)进行了 0、1、2、4、8、24h 测定，结果表明，其在24h内基本稳定。

表5 稳定性实验结果

2.8 空白实验

按照正柴胡饮颗粒制法，制成成药空白(即除去赤芍后制成的成药)，然后按照2.3项下进行。结果表明，正柴胡饮颗粒阴性(空白)对照液，在芍药苷的色谱峰处未见明显色谱吸收峰，故表明无明显干扰。

2.9 准确度试验

表6显示，采用加样回收法，精密称取已知含量的正柴胡饮颗粒(批号001110含量3.32mg/g)0.25g，精密加入芍药苷对照品(浓度0.0168mg/ml)50ml，按照2.3含量测定项下方法进行测定，以下式计算回收率。

表6 回收率测定结果

结果表明，本方法回收率准确。

3 讨论

供试品溶液制备试验了不同溶媒(40%甲醇、50%甲醇、60%甲醇、50%乙醇和水)超声处理的提取方法，结果用50%乙醇超声提取含量较高;流动相进行对比实验选择[甲醇-水(23:77)、甲醇-异丙醇-36%乙酸-水(25∶2∶2∶71)]后者的含量测定效果好;在使用加热回流、超声处理及冷浸3种提取方法时，超声处理简便易行且含量略高。

采用上述方法测定正柴胡饮颗粒中芍药苷的含量，简便、准确、灵敏度高，重复性好，可用于该制剂的质量控制。

[1]顾丽贞，等.药物分析杂志，1985，5(1):18.

[2]张庆生，等.中国中药杂志，1991，16(9):546.

[3]田飞敏，等.繁用生药的成分定量，广川书店，1991.