结直肠癌患者全身热疗术前后血浆前列腺素E2水平及细胞免疫功能变化的动态观察

张正华 吴学勇 侯凯生*

1 复旦大学华山医院肿瘤科（复旦大学上海医学院）（200040）

2 上海市静安区中心医院肿瘤科（200040）

前列腺素E2（prostaglandin E2，PGE2）是花生四烯酸代谢的主要产物之一，广泛存在于机体各组织器官内，在维护细胞自稳及增殖方面有着重要的意义。近来研究发现，多种恶性肿瘤具有释放PGE2的特性，外周血PGE2水平与机体免疫状态、疗效和预后密切相关，已有文献将恶性肿瘤患者手术前后外周血PGE2含量变化，作为评判手术疗效辅助性指标[1]。结直肠癌组织是目前所知分泌PGE2能力最高的恶性肿瘤，其PGE2含量为其他肿瘤的1.7～5.2倍[2]，故PGE2在结直肠癌手术疗效的判断中具有更大的临床价值。本研究旨在通过测定结直肠癌患者外周血PGE2水平动态变化，探讨全身热疗在治疗结直肠癌患者中的临床意义。

1 材料与方法

1.1 一般资料

研究对象选自复旦大学华山医院肿瘤科2002年6月至2006年12月收治的结肠癌患者24例，男13 例，女11 例，年龄14～73岁，平均（56.3±17.1）岁，对照组为24名健康体检者。本组患者入组条件是：术前肝肾功能正常；均经术后病理证实为癌，均为术后转移复发及常规放化疗失败的Duke Ⅳ期患者，除外大量吸烟、酗酒、全身急慢性炎症、常服非甾体类抗炎药、有其他恶性肿瘤病史、肺广泛毁损、术前已经接受放疗、化疗、生物治疗或术后发生切口感染、腹腔脓肿、吻合口瘘者。在术前4周内均无放化疗史，术前均无明显感染史。

1.2 方法

1.2.1 全身热疗

全身热疗设备采用美国FCM-TEMETTM1000型体外循环热疗系统及中国深圳ET-SPACE太空舱全身热疗系统.在全麻下全身核心温度控制在41.8～42.5℃持续2h，整个热疗全过程4～6h。

1.2.2 标本采集和处理

1.2.2.1 外周血PGE2

外周血样品取自手术前3d及术后10d抽取外周静脉血2mL，注入抗凝试管（抗凝剂为EDTA钠及indomethain溶液），1h内低温离心（3500转/分，4℃，15min），取上清液，-70℃保存待测。另抽取24例健康检者外周血作对照，处理同前。

PGE2测定用英国Amersham公司提供的PGE2·EIA药盒，敏感度为0.8pg/well，与PGD2、PGB2、PGA2、PGF1α、15-keto-PGF2α、TXB2的交叉反应＜0.01%。测定时严格按照规定的步骤操作和系统提供的公式计算。

1.2.2.2 细胞免疫功能检测

使用外周血淋巴细胞多项免疫指标检测。

材料与仪器：小鼠抗人单克隆抗体CD4/CD8/CD3、CD19、CD20、CD3/CD16+56、CD3/HLA-DR、CD3/CD25及同型对照、红细胞裂解液（Optilyse C）（法国Immunotech公司）。Epics XL·MCL流式细胞仪（美国BECKMAN COULTER公司）。

使用直接免疫荧光标记全血溶血法，流式细胞仪测定肿瘤患者外周血淋巴细胞表面抗原表达。 淋巴细胞表面标记，溶血，洗涤，重悬，检测，上计算淋巴细胞中各标记细胞的百分率。最后所有数据应用SPSS进行统计学处理。

1.2.3 统计处理

2 结 果

2.1 术前检测结果

结直肠癌患者的外周血PGE2与对照组比较见表1，结直肠癌患者外周血PGE2为（178.33±65.35）pg/mL，明显高于对照组24例正常人（献血员）的外周血PGE2[（11.69±5.6）pg/mL）]，P＜0.01；T细胞亚群以CD4+下降为主。提示结直肠癌患者较良性疾病患者以及正常人可产生更多的PGE2。

3.2 围手术期动态检测结果

结直肠癌组围手术期T细胞亚群和PGE 浓度变化特点见表1。结直肠癌组患者行全身热疗术10d后，外周血PGE2由（178.33±65.35）pg/mL 降至（25.82±4.37）pg/mL。呈显著降低。经相关性分析可发现CD4细胞与PGE 变化呈负相关。其r=-1.03，y=249.16-6.32 x（x为CD4细胞百分率，y为外周血PGE2浓度）。

表1 结直肠癌患者围手术期血浆PGE2的检测结果

3 讨 论

全身热疗是通过人为方法提高体温，运用热作用及继发效应选择性杀灭癌细胞，控制癌细胞广泛转移的治疗方法，其特点是不仅要使癌灶处的温度升高，而且使全身温度都升高到同一温度，已成为继手术、化疗、放疗和生物免疫治疗后出现的第5种肿瘤治疗方法，成为肿瘤综合治疗的有效手段。

通过大量的实验研究，许多学者认为，热疗杀伤肿瘤分子和细胞的机制有以下几种：①高温杀伤细胞膜蛋白，导致细胞膜通透性增加，低分子蛋白外渗，肿瘤细胞被破坏；还可能通过杀伤线粒体膜蛋白引起其流动性改变，导致能量转换障碍，肿瘤细胞因呼吸抑制而缺氧死亡；也可通过抑制参与肿瘤细胞复制、转录、修复有关的酶类及灭活染色体的组蛋白，引起DNA、RNA、蛋白质的合成受到抑制；杀伤细胞核支架、细胞骨架修复酶，使细胞骨架散乱。②提高机体细胞免疫功能，促进白细胞介素2（IL-2）和肿瘤坏死因子（TNF）的生成[3,4]并使肿瘤局部淋巴细胞浸润（LI）增加[5]。③提高野生型p53基因的表达，诱导肿瘤细胞凋亡[6]。④抑制肿瘤微血管的形成和促进血纤维蛋白溶酶原激活抑制因子1（PAI-1）的表达[7]。⑤还可使肿瘤血管闭塞、破坏，渗出增加。其中增强机体免疫力是很重要的一个方面，有文献报道，热疗后血清TNF-α水平升高[8]，也有学者观察微波热疗后，患者CD4细胞增加，CD4/CD8增大，表明免疫机制起一定的作用[9]。

自1971年Jaffe等[2]首次报道人类结直肠癌细胞在组织培养过程中可释放多量的前列腺素E（PGE）以来，人们相继发现多种肿瘤均有产生PG的特性[10]。我们以结直肠癌患者为研究对象，观察其PGE2含量变化，结果发现，结直肠癌患者外周血PGE2含量比正常人高（P＜0.01）；全身热疗后，外周血PGE2含量较术前明显降低。上述结果均提示，结直肠癌可产生大量的癌源性PG，结直肠癌患者血循环中具有持续高水平的PGE2。癌源性PG的增高可能与肿瘤组织内PG的合成及分泌增多有关，环氧化酶是PGE2合成起始步骤中的关键酶。环氧化酶抑制物可影响肿瘤组织内PG的含量。一些酸性抗炎药物如阿司匹林、吲哚美辛、芳基丙酸等都是环氧化酶的抑制物。它们无论在体内、体外均可明显抑制PG的合成与释放[11]。另外，肿瘤组织内除肿瘤实质细胞外，尚含有其他一些细胞，如单核-巨噬细胞和淋巴细胞等。这些细胞均能产生大量的PG，已有研究表明，PGE2能降低NK细胞的活性，且有促进肿瘤产生、发展和转移的作用[12]。

本文结直肠癌组既不伴有免疫缺陷病变，又无免疫抑制药治疗史，患者表现为CD4、CD3和CD4/CD8比值下降，且以CD4下降为主，表明T细胞亚群严重失街，聃能受抑或受损，提示为肿瘤负荷所致，与文献报道[13,14]相同。PGE2是一种能抑制淋巴细胞分化增殖的可溶性免疫抑制因子[15]，一般认为是通过抑制T细胞增殖而发挥作用。从本文结直肠癌组围手术期动态检测资料可看出PGE2显著增高同时CD4细胞显著下降，CD4/CD8比值显著下降，经过全身热疗术后PGE2下降，CD4细胞渐升，CD4/CD8比值渐趋正常。PGE2浓度变化与T细胞亚群失衡之间存在较好的相关性。

鉴于结直肠癌患者具有高水平的PGE2，且又与细胞免疫功能异常关系密切，全身热疗在杀灭癌细胞同时提高机体免疫力。外周血PGE2作为结直肠癌患者全身热疗治疗判断疗效的一项辅助性监测指标有较好的应用前景。

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