细菌特克等杀菌剂对魔芋软腐病的室内药效试验

吴金平 宋志红 郭 兰 兰敢生 顾玉成* 胡中立

(1湖北省农业科学院经济作物研究所,武汉 430064;2武汉大学生命科学学院,武汉 430072;3湖北省农业厅,武汉 430070;4三九企业集团成都普惠生物工程有限公司,成都 610500)

现在魔芋种植业面临的最大问题和威胁就是软腐病,该病害发生时产量损失一般在 30%～50%,严重时达 80%以上甚至绝收,农民是 “谈芋色变”[1]。针对这种情况,抗病育种显的尤为突出,但至今未发现具抗病性的类型,目前还是以药剂防治为主[2]。为此,我们筛选细菌特克等 3种杀菌剂进行室内药效试验,以探讨防治魔芋软腐病的有效药剂,为田间防治提供参考。

1 材料方法

1.1 供试材料

1.1.1 菌种。本实验室保存的魔芋软腐病病菌 Erwinia carotovora subsp carotovora(GenBank登录号为FJ463863)菌株。

1.1.2 供试药剂。链霉素(氨基葡萄糖型抗生素;北京中农

济兴生物技术有限公司生产);细菌特克(乙基链霉素胍;成都普惠生物工程有限公司);三氯异氰尿酸(三氯三嗪三酮;广西南宁化工集团有限公司生产)。各药剂浓度根据厂家说明书的建议调节。

1.1.3 培养基。试验采用 LB培养基,配方如下:酵母提取物 5g,蛋白胨 10g,NaCl 10g,琼脂 15g,蒸馏水 1000m L,pH 7.4～7.6。

1.2 研究方法

1.2.1 纸碟法。将软腐病病原菌在 LB培养基上划线,28℃培养 24h,用无菌水稀释成 1×107cfu/m l浓度的菌悬液供用按 100μL的菌液加入到 100mL灭菌的 LB固体培养基中,混合制成带菌的培养基。将灭过菌的直径为 10mm的滤纸片,用灭过菌的镊子等距离均匀的平放于带菌的培养基中,每个滤纸上加 10μl不同浓度的不同药剂,每皿放 3个,分别为同一种药剂的 3个浓度,无菌水为对照,3次重复。把培养皿置于 28℃恒温箱中培养,24h后观测结果(表 1)。采用十字交叉法测抑菌直径 2次,根据平均值确定药剂抑菌能力的大小。

1.2.2 离体培养法。取健康魔芋的球茎经无菌水清洗,75%酒精表面消毒,无菌水漂洗 2～3次后,用打孔器打成直径 1.5cm,高 1cm的圆柱形小块,将这些小块浸泡在 1×107cfu/mL浓度的菌悬液中 1h,无菌浸泡水为对照;然后将各组织块分别在不同浓度的各种药剂中处理 30s、1min和 5min,无菌水处理为对照,无菌滤纸上吸干药剂,将芋块放在打湿的滤纸上置于 28℃恒温箱中保湿培养,48h后观察结果(表 2)。每一处理 3次重复,重复 3次。

2 结果与分析

2.1 纸碟法

从表 1可以看出,细菌特克的最低有效抑菌浓度为 0.0015 mg/m L,而链霉素和三氯异氰尿酸的最低有效抑菌浓度在 10mg/mL左右,这 2种药剂的最低有效抑菌浓度是细菌特克的 6 000多倍,但链霉素和三氯异氰尿酸的最低有效抑菌浓度几乎没有差异。

2.2 离体培养法

在用链霉素和细菌特克处理魔芋小块时,魔芋小块保持切割下来的灰白色,坚硬;而三氯异氰尿酸处理的魔芋小块褐化,萎蔫。根据纸碟法的实验结果选择离体培养这 3种药剂的浓度,由于软腐菌侵染 45min后为不可逆侵染[3],所以将魔芋小块浸泡在 1×107cfu/mL菌液中 1h,然后将菌液倒掉,分别用不同浓度的药剂处理 30s、1min和 5min。从表 2可以看出,清水浸泡的魔芋小块不用药剂处理,48h后健康;软腐菌浸泡的魔芋小块用清水处理,48h后完全腐烂;被软腐菌侵染的魔芋小块在三氰异氰尿酸的药剂中处理 5min才有效,而其余时间无效,但链霉素和细菌特克在 30s的处理时间内都为有效。这就表明三氰异尿酸的渗透能力比较差,不适宜用于大田的魔芋软腐病的防治。

表 2 离体培养条件下供试药剂对魔芋软腐病菌的抑菌效果

3 小结与讨论

本结论主要是针对本次实验所选用的药剂而言的,只是供作参考,因为即便是同样的药剂由不同的厂家生产也会有不一样的防效。另外,不同的地方所使用的药剂也因当地的气候环境,土壤结构等而应有不同的选择。因此,在选择药剂时要考虑多方面的因素。

魔芋软腐病是魔芋生产中迫切需要解决的难题,现阶段在魔芋软腐病的防治上药效最好的是农用链霉素[4,5],但目前还没有一种药剂的防效在魔芋软腐病发病盛期 (8月中下旬)能够达到 50%。因此,寻找更加有效的药剂是当务之急。本次实验选用的细菌特克药剂比农用链霉素的效果要好的多,下一步工作是将该药应用于大田,希望其应用于生产能解燃眉之急。

[1]孙光谷 .关于魔芋种植业的发展[J].魔芋通讯.1999

[2]刘佩英主编.魔芋学[M].中国,北京,中国农业出版社,2004

[3]董汉松,王金生,方中达 .大白菜根表结构与软腐欧氏杆菌吸附和侵人的关系[J].植物病理学报,1993,23(3):275-280

[4]王贵斌,王新生 .硫酸链誊素等药剂防治魔芋软腐病试验[J].植保技术与推广,2002,22(5):32

[5]向振今 .不同农药防治魔芋软腐病田间药效试验[J].山区开发,2003,2(21):37