反相高效液相色谱法测定止嗽扫痰丸中盐酸麻黄碱含量

张 虹，谢俊峰，樊钰库

（1.宁夏回族自治区人民医院，宁夏 银川 750001； 2.宁夏回族自治区隆德县人民医院，宁夏 隆德 756003；3.宁夏回族自治区固原市人民医院，宁夏 固原 756000）

止嗽扫痰丸收载于《卫生部药品标准·中药成方制剂（第四册）》，具有宣肺定喘、止咳祛痰的功效，用于治疗咳嗽气喘、痰多胸闷。笔者对方中具有发汗散寒、宣肺平喘功效的麻黄[1]进行了含量测定方法研究，为进一步完善该制剂的质量标准提供依据，报道如下。

1 仪器与试药

Waters-Alliance 2695-2487型高效液相色谱仪；Waters-Brzze 1525-717-2996型高效液相色谱仪；UV-2550型可见紫外分光光度计。水为超纯水，乙腈、甲醇为色谱纯，乙醚、盐酸、磷酸二氢钾、氢氧化钠均为分析纯。盐酸麻黄碱对照品（批号为171241-200303，中国药品生物制品检定所）；止嗽扫痰丸（市售品）；缺麻黄阴性空白样品（按处方及制法自制）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件及系统适用性试验

色谱柱：Kromasil C18柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm）；柱温：35 ℃；流动相：0.02 mol/L磷酸二氢钾溶液（含0.2%三乙胺，用磷酸调pH 为 2.7）- 乙腈（100 ∶5）；流速：1.0 mL/min；检测波长：207 nm；进样量：10 μL。在此色谱条件下，色谱图见图1。可见，理论塔板数按盐酸麻黄碱计算不低于5 000，盐酸麻黄碱与相邻色谱峰的分离度大于1.5，拖尾因子符合要求。

2.2 溶液制备

取盐酸麻黄碱对照品适量，精密称定，加流动相制成每1 mL含50 μg的溶液，即得对照品溶液。取样品适量，研细，取粉末2.0 g，精密称定，精密加入甲醇50 mL，称定质量，超声处理（250 W，40 kHz）30 min，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液25 mL，蒸至近干，加水20 mL溶解转移至分液漏斗中，加浓氨试液1 mL，用乙酸乙酯萃取5次，每次15 mL，合并萃取液，蒸至近干，加盐酸乙醇溶液（1→20）1 mL，低温蒸干，用流动相溶解并定容至10 mL，用0.45 μm的微孔滤膜过滤，滤液作为供试品溶液。取阴性空白样品 2.0 g，精密称定，按供试品溶液制备方法同法制成阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

专属性试验：取2.2项下对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液，按拟订的色谱条件测定。结果供试品溶液在与对照品溶液相同保留时间有一致的色谱峰，阴性对照品溶液则无此峰（图 1）。

线性关系考察：取质量浓度为67 μg/mL的对照品溶液，按拟订的色谱条件，分别进样 1，2，5，10，15，20，30，50，100 μL，记录色谱图，计算峰面积，以峰面积对进样量进行线性回归，得回归方程 Y=1 932 347.79 X-40 425.66，r=1.000 0（n=9）。结果表明盐酸麻黄碱进样量在0.067～6.700 μg范围内与峰面积线性关系良好。

稳定性试验：取供试品溶液，于24 h内分别进样5次，记录峰面积。结果平均峰面积为1 538 117，RSD为0.18%（n=5），表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。

精密度试验：取同一对照品溶液，重复进样6次。结果平均峰面积为1 584 685，RSD为0.10%（n=6），表明仪器精密度良好。

重现性试验：取同一批号的样品，按拟订的方法重复测定6 次。结果平均含量为 0.639 mg/g，RSD=1.47%（n=6），表明方法重现性良好。

加样回收试验：取已知含量的样品（盐酸麻黄碱含量为0.639 mg/g）适量，研细，取约1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入质量浓度为0.364 8 mg/mL的对照品溶液2 mL，挥干，按供试品溶液制备方法制成待测溶液，依法测定含量，计算回收率。结果见表1。

表1 盐酸麻黄碱加样回收试验结果（n=6）

2.4 样品含量测定

依法测定5批样品，结果每g样品中盐酸麻黄碱的含量分别为 0.639，0.602，0.563，0.547，0.616 mg（n=2）。依据测定结果，每g样品中盐酸麻黄碱的含量可以暂订为不少于0.50 mg。

3 讨论

取盐酸麻黄碱对照品溶液，以流动相为空白溶液，在紫外分光光度计上于190～300 nm波长范围内扫描，结果盐酸麻黄碱在207.1 nm波长处有最大吸收，故选择207 nm为检测波长。

选择提取溶剂时，先用甲醇提取，可以除去部分脂溶性杂质，甲醇提取液蒸干后加水溶解，再用乙酸乙酯萃取，又可除去部分水溶性杂质。分别以乙醚、氯仿、乙酸乙酯为提取溶剂依法制备供试品溶液并测定含量，结果氯仿、乙酸乙酯提取的含量明显高于乙醚提取，考虑氯仿的毒性较大，选择以乙酸乙酯作为提取溶剂。以乙酸乙酯作为提取溶剂，分别提取3～7次并测定含量，结果样品提取5～7次的含量无明显差别。

曾对不同比例的流动相进行了考察，并参考文献[2-5]优化条件，以文中流动相时pH恒定，出峰稳定性及峰形均好。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京：化学工业出版社，2005：223.

[2]王林丽，陈 亮，傅若秋，等.HPLC法测定抗病毒口服液中盐酸麻黄碱的含量[J]. 中国药房，2007，18（15）：1 166.

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[5]周 颖，刘哨凡，霍晓梅.高效液相色谱法测定小青龙合剂中盐酸麻黄碱含量[J]. 中国药业，2007，16（20）：41-42.