前胡超临界CO2流体提取物及挥发油的GC-MS分析

徐国兵， 张亚中， 韩玲玲， 班永生

（1.安徽省食品药品检验所，安徽合肥 230051;2.安徽省中药标准化工程技术研究中心，安徽合肥 230051）

前胡为伞形科植物白花前胡（Peucedanum praeruptorumDunn）的干燥根，辛、苦，微寒;归肺经。散风清热，降气化痰，用于风热咳嗽痰多，痰热喘满，咯痰黄稠［1］。主要含有香豆素类化合物，如白花前胡甲素、乙素、丙素、丁素等，还含有烷烃、酯、酮、倍半萜、芳香化合物和萘醌类等挥发油类［2］。现代药理研究证明，前胡的香豆素类和挥发油类成分是其临床疗效的主要有效成分［3，4］。对传统的水提和醇提方法提取前胡含香豆素和挥发油的提取物进行化学成分研究已有文献［4，5］，而使用 SFE-CO2所得的前胡提取物，采用GCMS方法进行定性分析尚未见报道，我们比较前胡的超临界提取物和挥发油，证明SFE-CO2在前胡化学成分提取上具有明显优势。

1 材料与仪器

1.1 仪器与试剂 HL-5L/50 MPa-ⅡCWQ型超临界流体（CO2）萃取仪（杭州华黎泵业有限公司）。GC MS QP 2010 PLUS气相色谱质谱联用仪;AOC-5000全自动进样器;GC-MS Solution色谱工作站;NIST 05标准质谱图库、Wiley 7质谱图库（日本Shimadzu公司随机附带）。

1.2 试剂与材料 色谱甲醇（美国TEDIA LOT81923）。前胡药材产自安徽宁国市，由安徽省宣城市药检所鉴定和提供。

1.3 超临界提取物 取前胡药材粗粉，精密称定，置超临界萃取釜中，设定萃取温度为60℃，压力为28 MPa;萃取时间2 h;分离釜I温度45℃，压力为9 MPa;分离釜Ⅱ温度30℃，压力为3.5 MPa。制备前胡药材超临界提取物。

1.4 挥发油 取前胡药材，粉碎成粗粉，精密称取一定量，照挥发油测定法（中国药典2005年版一部附录X D），制备前胡挥发油。

2 实验条件

2.1 供试品溶液的制备

2.1.1 挥发油供试品溶液 取前胡挥发油一定量，加乙酸乙酯萃取，分取乙酸乙酯层，稀释成每1 mL含前胡药材约0.10 g的溶液，即得。

2.1.2 超临界CO2提取物供试品溶液 取超临界提取物，加乙酸乙酯稀释成每1 mL含前胡药材约0.10 g的溶液，即得。

2.2 色谱条件 色谱柱:RxiTM-5 ms 30 m×0.25 mm×0.25 μm（美国Restek公司）;进样口温度320℃，程序升温起始温度40℃，以1℃/min的升温至45℃，保持2 min，再以12℃/min的升温至220℃，保持2 min，再以3℃/min的升温至290℃，保持1 min。载气为氦气，流速为39.9 mL/min。分流比为50:1。质谱接口温度320℃。离子源温度为200℃，电子轰击电压70 eV。全离子扫描，扫描范围为m/z:10～400。采集延时0.5 min。图谱采集时间:47.5 min。归一化法计算含量。

3 样品测定

分别取前胡超临界提取物和挥发油供试品溶液，按上述优化后的GC-MS条件分别进样2.0 μL测定。总离子流图分别见图1、图2;结果见表1。前胡超临界提取物和挥发油中共检出49种成分。

图1 前胡超临界提取物GCMS总离子流图

图2 前胡挥发油GCMS总离子流图

表1 前胡超临界提取物（A）和挥发油（B）中主要化学成分

4 结论与讨论

4.1 与传统的中药提取分离技术相比，SFE-CO2具有提取效率高、环境好等特点，可以在接近室温（35～40℃）及CO2气体笼罩下进行提取，有效地防止了热敏性物质的氧化和逸散，并能把高沸点，低挥发度、易热解的物质在其沸点温度以下萃取出来。由于全过程不用有机溶剂，萃取物无有机残留，基本保证了的纯天然性。

4.2 超临界提取物相似度大于75的色谱峰归属占98.66%，其中:长链羧酸、醛、酮等占38.1%;香豆素类占31.19%;3-甲基-4-羟基-2-丁酮（2-Butanone，4-hydro-3-methyl-）占2.21%，为挥发油中不含有的成分;与挥发油相同的成分占25.43%。表明SFECO2，对前胡有效成分的提取较完全，不仅能提出前胡药材中小分子的挥发性成分，对前胡主要有效成分香豆素类提取效率高（经HPLC分析，超临界提取物中香豆素类的提取率较水提、不同浓度的醇提高，将另文发表），同时，能提取长链羧酸、醛、酮和醇，为研究前胡的指纹图谱、建立提取物质量标准及合理开发利用奠定了一定的基础。

4.3 挥发油中相似度大于75的峰归属占97.38%，主要含有二甲氧基胺、氨基脲、酯类、烯烃、萘类、烷烃等，与超临界提取物相同的成分占77.93%。在19.45%的不同成分中，丙酸乙酯占12.8%、β-蒎烯占1.36%，其余14种成分占5.29%。由于挥发油提取过程中温度较高，可能使部分成分在提取过程中发生转化;同时，由于在超临界提取物中长链羧酸、醛、酮及香豆素类所占比例较大，在与挥发油色谱峰相同保留时间处，往往色谱峰小、丰度较低，未作进一步归属。

4.4 在超临界提取物色谱图上，保留时间为34.35 min与38.98 min的两种线型香豆素，数据库中检出的结果相同，相似度均为93;保留时间为42.45 min、43.84 min与44.99 min的3种角型香豆素，数据库中检出的结果也相同，相似度均大于94。可能由于这些成分分子式相同，而构型构象上存在差异;或由于随机附带的NIST05.LIB、Welliy数据库未能及时更新，造成不同保留时间出的色谱峰检索结果相同，有待根据色谱保留时间、文献研究报道和其它光谱辅助解析等手段，进一步鉴定。

4.5 由于前胡超临界提取物中成分较复杂，各成分的沸点差异较大，在采用GCMS进行分离条件摸索时，曾选择多种程序升温方法，以期使各类成分既能达到满意分离，又能在相对短的时间内完全出峰，结果升温程序为:起始温度40℃，以1℃/min的升温至45℃，保持2 min，再以12℃/min的升温至220℃，保持2 min，再以3℃/min的升温至290℃，保持1 min，可达到较好的分离。

致谢:安徽中医学院第一附属医院夏伦祝教授、章俊茹老师提供前胡超临界提取帮助。

［1］中国药典［S］.一部.2005:187.

［2］孟德玉，毛子成，何兴金，等.药用前胡研究进展［J］.中国野生植物资源，2005，24（3）:10-14.

［3］王德才，马 健，孔志峰，等.白花前胡总香豆素解热镇痛抗炎作用的实验研究［J］.中国中医药信息杂志，2004，11（8）:688-690.

［4］潘九英，吴飞华，金芝贵.白花前胡有效成分药理作用研究进展［J］.上海中医药杂志，2006，40（5）:64-65.

［5］刘布鸣，徐 勤.用GC/MS、GC分析中药前胡中白花前胡丙素、丁素和紫花前胡苷元［J］.广西科学，2002，9（4）:294-297.