fascin及Ki-67蛋白在膀胱癌中的表达及意义

陈雪磊，李炳勋，沈海林，陈启光，张哲，毕建斌，孔垂泽

（中国医科大学 附属第一医院泌尿外科，沈阳 110001）

肌成束蛋白（fascin）作为肌动蛋白结合蛋白家族中的一员，在近年来的研究中发现，其在许多上皮来源的肿瘤细胞系及肿瘤组织中表达上调，如乳腺癌、食管癌等，并与肿瘤侵袭及转移有关［1］。Ki-67即细胞核相关抗原，是反映癌细胞的增殖活性的指标，与肿瘤的发展、转移及预后高度相关［2］。本文通过观察膀胱上皮癌中的fascin和Ki-67蛋白的表达，研究fascin与膀胱癌临床病理指标及Ki-67表达的关系，为膀胱癌中fascin的研究积累更多的资料。

1 材料与方法

1.1 临床资料

收集我院泌尿外科2007年9月至2008年7月的膀胱上皮癌手术标本111例，同时收集患者相关临床病理资料。全部病例中男性93例，女性18例。患者年龄37~85岁，中位年龄66岁。42例正常膀胱上皮取自手术断端，距肿瘤边缘大于5 cm。所有患者均为初发病例，术前均未接受放化疗。表1。

1.2 研究方法

采用免疫组织化学方法。所用单克隆抗人fascin抗体（克隆号55k-2）购自美国Millipore公司。Ki-67蛋白抗体、二抗试剂盒、DAB显色液均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

1.3 结果判定

所有切片蛋白表达的评价均由2名病理医生在未知情的前提下各自独立完成，遇到结果不统一时，两名医师共同讨论综合分析意见。fascin表达定位于癌细胞的胞质中，在正常上皮血管内皮细胞也有表达，呈棕黄色颗粒状。fascin按照表达面积分为5组：无表达细胞（0）、表达的细胞数占切片总细胞数＜25%（1+）、25%~50%（2+）、50%~75%（3+）、＞75%（4+）。按照表达强度分为3组：用已确定为阳性的转移性乳腺癌标本的反应强度作为对照，弱于它（1+）、与其相同（2+）、表达比之强（3+）。每张切片最后fascin综合表达情况用表达面积与表达强度的乘积表示，并分为 4 个级别：-（0）、+（1-4）、++（5-8）、+++（9-12）。Ki-67蛋白阳性表达标准：以细胞核成棕褐色弥漫状或颗粒状表现为阳性细胞。每张染色切片随机选取5个视野，计算每个视野中阳性细胞数占总细胞数的比例，然后得到5个视野的平均值，阳性细胞所占比例＜20%为阴性、≥20%为阳性［3］，并分为不同等级：20%~50%（+）、50%~75%（++）、＞75%（+++）。

1.4 统计学分析

fascin及Ki-67蛋白的表达与膀胱癌生物学行为的关系及两种蛋白之间的相关性应用SPSS13.0软件进行χ2检验分析。

2 结果

2.1 fascin及Ki-67蛋白在正常膀胱上皮和膀胱上皮癌中的表达

在111例手术患者中有42例取出正常膀胱上皮组织，其余因手术方式原因无法切取。在42例正常膀胱上皮组织中，fascin及Ki-67蛋白均未表达。在111例膀胱上皮癌标本中fascin有94例呈阳性表达，表达阳性率为84.7%。Ki-67蛋白有92例呈阳性表达，表达阳性率为82.9%。fascin及Ki-67蛋白在正常膀胱上皮及膀胱上皮癌中的表达具有明显的差异性（P＜0.01）。见图 1，图 2。

2.2 Ki-67蛋白在膀胱上皮癌标本中的表达与膀胱癌生物学行为的相关性

Ki-67蛋白与肿瘤病理学分级（P=0.045）、临床分期（P=0.048）、肿瘤大小（P=0.032）具有相关性；与患者年龄（P=0.282）、性别（P=0.250）无相关性。这与目前的研究结果相一致［2］。

2.3 fascin的表达与膀胱癌生物学行为及Ki-67蛋白表达的相关性

fascin表达与年龄（P=0.329）、性别（P=0.339）及病理分级（P=0.380）均无相关性；与肿瘤临床分期（P=0.001）及肿瘤大小具有正相关性（P=0.011）。通过分析，fascin及Ki-67蛋白在膀胱癌中的表达具有明显的正相关关系（P=0.001）。见表1。

3 讨论

膀胱癌作为泌尿系统常见的恶性肿瘤，其发生率和死亡率均居泌尿系肿瘤的首位［4］。目前寻找与膀胱癌进展及预后有关的分子标志物，帮助膀胱癌的早期诊断，指导膀胱癌的治疗，成为研究的热点。fascin是一种分子量为55 kDa的细胞骨架蛋白，在人体组织中，fascin在乳腺癌、卵巢癌、肺癌、食管癌、胃癌、结肠癌、胆管癌等肿瘤组织中均出现高频率的阳性表达，并与高肿瘤级别、高增殖分数相关［5~7］。这些均提示fascin的上调表达在上皮肿瘤组织中可能具有组织特异性，并且与恶性肿瘤存在显著的相关关系。

我们通过免疫组化方法研究了fascin在膀胱上皮癌中的表达。结果在我们这组数据中，fascin蛋白在膀胱上皮癌的阳性表达率为84.7%，与其在正常膀胱移行上皮中的表达具有明显的差异性。此结果提示fascin在上皮组织来源的肿瘤中的高表达可能具有普遍性。以往的研究发现，不同组织来源的肿瘤fascin阳性表达率有明显差异，在胰腺癌中阳性表达率为95%，非小细胞肺癌中的阳性率为89%，而乳腺癌中只有16%［1］。结合本次研究，可以看出fascin蛋白的表达与各肿瘤不同的发生机制可能存在相互联系。

目前已经证实，fascin在恶性肿瘤中的表达与肿瘤的病理学分级、临床分期等具有正相关性，诸如食管癌、胃癌、乳腺癌、卵巢癌等［5~7］。在我们的研究中，同样发现fascin的表达与膀胱癌的临床分期、肿瘤大小有关。但与肿瘤的病理学分级无关，这可能与我们这组病例低度恶性肿瘤样本量过少有关。但从fascin的表达程度来看，随着肿瘤级别的增高，其高表达率也随之增高。这些均提示在恶性肿瘤的发展过程中，fascin积极地参与了肿瘤的生长侵袭及恶性转化。

表1 fascin在膀胱上皮癌中的表达及与膀胱癌生物学行为及Ki-67蛋白的关系Tab.1 The relation between the expression of fascin and pathological features in bladder carcinoma

Ki-67（细胞核相关抗原）作为在增殖细胞中表达的一种抗原，其表达与肿瘤的分化程度、浸润、转移以及预后密切相关，是反映细胞增殖活性的指标。目前已经证实Ki67在膀胱癌中高表达，且与肿瘤细胞病理分级、临床分期相关［8］，本次研究也证实了这点。通过本组病例，我们发现在膀胱癌中fascin与Ki-67蛋白具有明显的正相关性。这说明了两种基因可能存在某种相互作用调节关系，在肿瘤细胞的发生发展中，出现高增殖和高运动性同时存在的现象。对于二者双阳性的膀胱癌患者，可能具有更高的恶性程度及浸润转移能力，也预示着较差的预后，在临床上需引起注意。

总之，fascin可以作为膀胱癌的一个分子标志物，用作膀胱癌的早期诊断，其联合Ki-67蛋白、肿瘤的病理分级和临床分期可以更好的评价预后。至于其可否成为膀胱癌基因治疗中一个新的靶点，需要更深入的研究。

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