台州市猪口蹄疫O型合成肽疫苗免疫情况调查与研究

陈冬祥，王 娜，林小辉，李玲燕，丁昌华

（1.浙江省台州市畜牧兽医局，浙江 椒江 318000；2.浙江省路桥区畜牧兽医局，浙江 路桥 318050；3.浙江省黄岩区畜牧兽医局，浙江 黄岩 318020；4.浙江省椒江区畜牧兽医局，浙江 椒江 318000）

我市从20世纪90年代开始一直使用猪O型口蹄疫灭活疫苗预防猪口蹄疫疫情的发生，但近年来随着生猪各种传染病发生的复杂化，特别是猪蓝耳病、猪附红细胞体病等疫病的发生，甭管如何严格防疫，猪O型口蹄疫免疫抗体合格率也一直低徊难升，为此我市从2008年底开始试用猪口蹄疫O型合成肽疫苗。为了有效预防和控制生猪口蹄疫疫情，更好地掌握猪口蹄疫O型合成肽疫苗免疫后抗体水平的消长趋势，结合我市要求的免疫方案和计划，制定出临床合理的、科学的适合本地区的免疫程序，为此进行了本调查研究。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 采样猪场

台州市路桥区、椒江区、黄岩区各8个规模猪场。

1.1.2 采样动物

均为90～120日龄大小基本相同的商品猪。

1.1.3 使用疫苗

猪口蹄疫O型合成肽疫苗:申联生物医药（上海）有限公司，批号为20090102、20090105、20090301。

1.1.4 检测试剂盒

猪口蹄疫病毒VP1结构蛋白抗体ELISA诊断试剂盒:批号为20080622，上海优耐特生物医药有限公司生产。

1.2 方法

1.2.1 血样采集:全群免疫，第一次随机采样，采样时标记，以后按标记采样。

1.2.2 注射剂量和方法:耳根后肌肉注射1mL。

1.2.3 疫苗注射反应观察:记录免疫注射当天和后3天的采食、过敏反应情况。

1.2.4 抗体检测方法:所有样品用VP1结构蛋白抗体ELISA试剂盒检测。

1.2.5 判定标准:VP1结构蛋白抗体ELISA的抗体效价≧25判为合格。

2 结果

2.1 接种疫苗后猪群反应

从试验的3个区24个猪场近万头育肥猪临床反应观察，免疫口蹄疫O型合成肽疫苗的猪基本未出现过敏反应，免疫后采食量整体无明显的变化，只有个别猪第一天采食量减少，第二天逐渐恢复正常。

2.2 3个区整体抗体检测结果

在3个区分别选8个商品猪场，均为免疫过两次疫苗的血样，整体阳性率分别为93.33%、95.56%、93.75%（见表1）。

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2.3 免疫后不同时间抗体检测结果

从表中可以看出，首次免疫后15天，阳性率在30%至40%之间；首免后30天阳性率明显升高，均在70%以上；二免后阳性率均在95%以上，而且呈上升趋势。

2.4 免疫后不同时间抗体检测OD值变化

首次免疫后15天OD值较低，只有部分血样呈阳性，但首次免疫后30天，OD值明显升高，而且随着时间的延长，抗体检测平均OD值逐渐上升（见表 3、图 1）。

2.5 对不同时间接种不同批次疫苗的猪场进行抗体检测，3个区、3个不同批次疫苗的总体阳性率相差不大（见表4）。

3 小结与讨论

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3.1 生猪免疫或感染FMD抗原以后，诱导产生T细胞参与或介导特异性免疫应答，产生中和抗体中和与调理破坏FMDV，但由于传统灭活疫苗生产存在生物安全隐患和副反应，可能引起散毒及不能产生交叉保护等问题[1]，因此研发一种安全性好，免疫效果稳定的疫苗就非常必要。猪口蹄疫O型合成肽疫苗采用固相多肽合成技术，人工合成含连续B细胞抗原位点 VP1（137－156）和 3A（21－35）的合成肽并引入一个Th细胞表位，就能克服FMDV的遗传限制，能够刺激机体显著水平的血清特异性抗病毒活性，且能诱导产生高质量的CD8+T淋巴细胞，因此合成肽疫苗具有更强的免疫原性和T细胞增殖能力[2]，很好的预防猪O型口蹄疫的发生。而监测就应采用猪口蹄疫VP1结构蛋白抗体ELISA诊断试剂检测。

3.2 本次调查表明，与以前使用的口蹄疫灭活苗相比，使用合成肽苗免疫对生猪的应激小，基本无副反应。临床上猪出现过敏反应的直接原因是全病毒疫苗（浓缩苗）中存在着异源蛋白，是致敏因子产生的变态反应所致；而猪口蹄疫O型合成肽疫苗的多肽抗原为人工合成，不需经细胞培养、灭活剂灭活等，其纯度较高，因此不存在细胞碎片、血清等异源蛋白，是一种单一的抗原，能有效避免异源蛋白引发的过敏反应。同时使用的佐剂为法国SEPPIC公司专为口蹄疫合成肽疫苗设计制作的植物源性佐剂，从而有效避免异体蛋白引发的过敏反应，为口蹄疫免疫工作减少了不必要的纠纷。

3.3 从3个不同批次的疫苗抗体检测结果可以看出，猪口蹄疫O型合成肽疫苗的质量比较稳定，免疫后抗体水平均较高。其主要原因是合成肽疫苗的核心成分即口蹄疫病毒VP1蛋白的合成及细胞位点的结合系采用全球最先进的合成仪控制，抗原含量精确稳定；其次，合成肽疫苗克服了传统猪口蹄疫灭活疫苗随保存时间延长而免疫原性下降的缺点。

3.4 猪口蹄疫O型合成肽疫苗免疫抗体的检测不能使用传统的血凝试验，因为其致敏抗原非纯净病毒粒子，而是含大量的细胞蛋白，故而特异性不好，因此，合成肽疫苗的抗体检测需要使用VP1结构蛋白抗体ELISA试剂盒进行检测。

3.5 从24个猪场的抗体检测总体结果显示，抗体整体阳性率均较高。首次免疫后30天检测阳性率平均为75.68%，高于部颁标准70%的抗体合格率；二免后15天、30天免疫抗体阳性率平均为90.81%和94.59%，因此经二次免疫后抗体效价才稳定上升，免疫效果才能得到保证。

3.6 本次调查样本采集数量不大，试验的24个猪场饲养管理水平较好，与广大农户的饲养水平有一定差距，且未做保护期试验，因此检测结果有一定局限性，为更科学的开展疫苗免疫效力的调查研究，需要进一步扩大样本范围并拉长试验时间，而且疫苗免疫后产生的保护性抗体效价与抗病毒感染保护力之间的关系有待进一步验证。

[1]杜进鑫，王永录.口蹄疫免疫与疫苗关系研究进展 [J].中国动物检疫，2009，26（7）:67.

[2]Guzman E，Taylor G，Charleston B，et al.An MHC-restricted CD8+T-cell response is induced in cattle by foot-and-mouth disease virus（FMDV）infection and also following vaccination with inactivated FMDV[J].J Gen-Virol，2008，89（3）:667-675.