甜菜夜蛾核型多角体病毒的致病力测定与群养对病毒产量的影响

徐树兰，李辉，陈其津

（1.中山大学生命科学学院，广州，510275；2.广州市生物防治站）

甜菜夜蛾核型多角体病毒的致病力测定与群养对病毒产量的影响

徐树兰2，李辉2，陈其津1

（1.中山大学生命科学学院，广州，510275；2.广州市生物防治站）

以3龄中甜菜夜蛾幼虫为试虫，测定出甜菜夜蛾核型多角体病毒的半致死浓度（LC50）为1.66×105PIB/mL，计算出 1×108PIB/mL、1×107PIB/mL、1×106PIB/mL 3 种浓度的半致死时间（LT50）分别为 3.95 d，4.47 d，5.35 d；研究了甜菜夜蛾群养条件对病毒产量的影响，确定出感染浓度为1×108PIB/mL、感染龄期为5龄初幼虫、饲养密度为30头/dm2时获得的病毒产量最高。

甜菜夜蛾核型多角体病毒；生物测定；幼虫密度；病毒产量

甜菜夜蛾核型多角体病毒 （Spodoptera exigua Nuc1eopo1yhedrovirus，SeNPV）是一种能有效防治甜菜夜蛾的病原微生物。自20世纪60年代以来，国内外学者在病毒的分离鉴定、致病力测定、致病机理、分子生物学、病毒制剂的研究以及田间应用等方面做了许多工作[1～4]。但对工厂化生产病毒的方法还不是很清楚，因此，本试验利用美国的分离毒株对甜菜夜蛾日本品系的致病力进行了测定，并对甜菜夜蛾群体饲养与病毒产量的关系进行了研究，以期为大规模饲养甜菜夜蛾、生产病毒提供参考。现报道如下。

1 材料与方法

1.1 供试幼虫与病毒株

甜菜夜蛾（Spodoptera exigua）幼虫日本品系由中山大学昆虫学研究所养虫室提供，为人工饲料饲养的健康幼虫。

甜菜夜蛾核型多角体病毒毒株由美国Federici教授惠赠，中山大学昆虫学研究所庞义教授提供。

1.2 感染方法

用PBS缓冲液将病毒原液稀释成6个浓度：1.0×108PIB/mL、1.0×107PIB/mL、1.0×106PIB/mL、1.0×105PIB/mL、1.0×104PIB/mL、1.0×103PIB/mL。均匀切取一定大小的饲料（使幼虫1 d内吃完），放入直径3 cm、高5 cm的塑料小管中，用微量加样器吸取10 L病毒液，均匀滴加于饲料表面，将健康的3龄中幼虫放入其中，每管1头，移入温度为（27±1）℃，相对湿度70%，光暗比为12 h∶12 h的光照培养箱内饲养。

群养增殖时，先把3龄中健康幼虫接入直径为13 cm，高2.5 cm的塑料小圆盒中喂食涂过毒的饲料，饲养条件同单头饲养的条件。

1.3 管理和记录

单头饲养时，幼虫取食完感染病毒的饲料后，加入正常饲料继续饲养，每天更换饲料，逐日检查活虫数和病毒感染死亡虫数。用定量蒸馏水清洗和收集当日死虫，4℃保存，留待多角体计数，于感染后第10天结束。每处理30头，重复3次，以健康幼虫作对照。

群养增殖时，感染24 h后，转入大塑料方盒（40 cm×25 cm×10 cm）内进行饲养，同时更换无毒饲料。每天观察清理，更换新鲜饲料，回收病死虫体，10 d内全部结束。

1.4 感染龄期对群养病毒增殖量的影响

用浓度为1.0×108PIB/mL的病毒液分别感染3龄中、4龄中和5龄初幼虫，感染24 h后，按照30头/dm2的饲养密度，转入大塑料方盒中饲养。10 d后，测定幼虫的病毒感染死亡率、平均单头幼虫病毒含量、1 g虫尸病毒含量和病毒总产量。

1.5 幼虫饲养密度对病毒增殖量的影响

用40 cm×25 cm×10 cm的大塑料方盒，分别按15，20，25，30，35，40，45 头/dm2的密度饲养 5 龄初染毒的幼虫，每日分多次收取即将死亡的幼虫，记录所收幼虫头数，并称质量，以测定病毒感染死亡率、总虫尸质量、平均单头幼虫病毒含量和病毒总含量；同时从每次收取的虫尸中随机抽取10头，分别称质量并测算多角体含量，计算1 g虫尸病毒含量。

1.6 多角体计数及生物测定数据处理

分别将各处理每日收集的病死虫液匀浆、稀释，用血球计数板计数。每样品重复3次。

用常规生物统计方法求出各组的死亡率或校正死亡率。用计算机软件求出LC50，LT50及其95%置信限[3]。

2 结果与分析

2.1 SeNPV对甜菜夜蛾的致病力测定结果

利用甜菜夜蛾核型多角体病毒对3龄中甜菜夜蛾的LC50及LT50进行测定，结果见表1。从表1结果可明显看出，随着感染浓度的增高，LT50就缩短， 当浓度为 1×106PIB/mL时，LT50是 5.348 d；而当感染浓度高达1×108PIB/mL时，LT50为3.951 d。

2.2 感染龄期对SeNPV增殖量的影响

从表2可知，用1×108PIB/mL浓度感染5龄初甜菜夜蛾，其感染率尽管比感染3龄中、4龄中幼虫的低，但是平均单头多角体病毒产量和多角体总产量都显著高于3龄中和4龄中幼虫感染的产量。因此，以高浓度感染高龄幼虫所获得的高病毒产量的方法，能克服甜菜夜蛾幼虫个体较小，病毒增殖相对困难的问题。

2.3 饲养密度对SeNPV增殖量的影响

从表3可知，不同的饲养密度对SeNPV增殖有着较大的影响。当饲养密度为15~30头/dm2时，随着饲养密度的增高，SeNPV的增殖量不断增高。但密度超过30头/dm2后，虫尸回收率降低，病毒总产量也下降。因此，以饲养密度30头/dm2的增殖效果最佳。

表1 SeNPV对3龄甜菜夜蛾的半致死浓度和时间测定

表2 感染龄期对SeNPV增殖量的影响

表3 饲养密度对SeNPV增殖量的影响

3 小结与讨论

本研究利用美国的分离毒株对日本的甜菜夜蛾品系进行生物测定，LC50测定结果为 1.66×105PIB/mL，与张俊杰等[5]报道的中国分离毒株的致病力相近。但在田间使用是否达到这一效果，有待进一步的研究。致病力测定一般采用2～3龄虫，供试幼虫的虫龄要一致，幼虫太小易伤亡，太大敏感性差。所以本试验采用3龄中的幼虫，若采用2龄中或3龄初的幼虫，其感染死亡率会更高。

影响群体饲养甜菜夜蛾增殖病毒产量的因子很多，本文仅选择了感染龄期和饲养密度两方面内容进行研究，目的是为了工厂化生产提供可行的试验数字和技术，其他影响病毒产量的有关因子我们正在研究中。

[1]陈其津，李广宏，庞义，等.甜菜夜蛾核型多角体病毒杀虫剂研究进展[J].中国病毒学，2000（15）：234-235.

[2]李广宏，陈其津，庞义.甜菜夜蛾核多角体病毒的研究与应用进展[J].中国生物防治，1999，15（4）：178-182.

[3]陈其津，李广宏，林杨帆.杀虫剂毒力测定数据的快速运算与分析[J].中山大学学报论丛，2001，21（3）：39-43.

[4]Smith P H,V1ak J M.Quantitative and qua1itative aspects in the production of a nuc1ear po1yhedrosis virus inSpodoptera exiguaLarvae[J].Ann App1 Bio1,1988,112(2):249-259.

[4]张彬，刘怀，王进军，等.甜菜夜蛾研究进展[J].中国农学通报，2008，24（10）：427-433.

[5]张俊杰，李茂俭，未荣杰，等.甜菜夜蛾核型多角体病毒中国分离株的分离鉴定及毒力测定 [J].中国病毒学，2001，16（4）：361-362.

Bioassay ofSpodoptera exiguaNuclear Polydedrosis Virus and Effect of Different Larvae Density on SeNPV Yield

XU Shu1an2,LI Hui2,CHEN Qijin1
(1.Co11ege of Life Sciences,Sun Yat-sen University,Guangzhou 510275;2.Bio1ogica1 Contro1 Station of Guangzhou)

Bioassay method was used to study the pathogenicity ofSpodoptera exiguanuc1ear po1ydedrosis virus(SeNPV)to the midd1e 3th-instar 1arvae ofS.exigua.The resu1ts demonstrated thatLC50of SeNPV toS.exiguawas 1.66×105PIB/mL.The resu1ts a1so showedLT50was 3.95 days,4.47 days and 5.35 days when the concentrations of 1×108PIB/mL,1×107PIB/mL,1×106PIB/mL were used respective1y.Furthermore,the effect of 1arva1 stadium and 1arva1 popu1ation density on mu1tip1ication was a1so studied.It is showed that greatest production of SeNPV cou1d be obtained when the ear1y 5th-instar 1arvae are infected by concentration of 1×108PIB/mL and reared with the density of 30 1arvae per square decimeter.

Spodoptera exiguanuc1ear po1ydedrosis virus;Bioassay;Larvae density;SeNPV yie1d

10.3865/j.issn.1001-3547.2010.18.004

公益性行业（农业）科研专项项目（200803007），广州市科技计划项目（2007Z3-E0581）

徐树兰（1981-），女，硕士，主要从事微生物杀虫剂的研究

陈其津，通信作者，电话：13610044229，E-mai1： 1sscqj@mai1.sysu.edu.cn

2010-06-22