慢泻停丸质量标准研究

张玉洁

慢泻停丸质量标准研究

张玉洁

目的 制订慢泻停丸质量标准。方法 用TLC法对黄连、当归、五倍子、山茱萸进行了鉴别试验，用HPLC法测定药品中马钱苷含量。结果 用TLC法检出了黄连、当归、五倍子、山茱萸。回归方程: Y=423 17.6090x -586.5188，r=0.9998(n=6)，平均回收率98.6%,RSD为1.49%。结论 所建立的方法简便可行，灵敏、准确、专属性强、重复性好，可作为该制剂的质量控制方法。

慢泻停丸；黄连；没食子酸；马钱苷；TLC；HPLC

慢泻停丸为我省医院制剂注册药品，由石榴皮、黄连，黄柏、五倍子、山茱萸等13味中药组成，具有涩肠止泻，温中行气的功能。适用于体虚多汗、便溏泄泻、久泻脱肛等症。为了有效地控制该制剂的药品质量，对处方中的黄连、当归、五倍子、山茱萸进行了TLC鉴别，对处方中的山茱萸中所含的马钱苷进行了含量测定，以有效地控制药品质量。

1 仪器及材料

高效液相色谱仪(waters2695)、紫外检测品(waters2996)、色谱柱(VP-ODS,150mm×4.6mm，5μm)、三用紫外分析仪(上海顾村仪器厂)硅胶G(青岛海洋化工厂)、黄连(120913-200407)、当归(120927-200613)、没食子酸(110831-200302)、熊果酸(110742-20051)，马钱子苷(111640-200503)对照品及对照药材均由中国药品生物制品检定所提供。慢泻停丸(由我市医院提供，批号20090612 20090725 20090804)。HPLC用甲醇(上海吴泾化学总厂)为色谱醇；水为重蒸馏水，其它试剂均为分析纯。

2 薄层色谱鉴别

2.1 黄连薄层色谱鉴别

取本品粉未2g，加乙醚20ml，超声处理10min，滤过，乙醚液备用，药渣挥去乙醚，加甲醇30ml，超声处理20min，滤过，滤液置水浴上蒸干。残渣加甲醇10ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄连对照药材50mg，加甲醇5ml，超声处理5min，取上清液作为对照药材溶液；并同法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版)［1］试验，吸取上述3种溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯-异丙醇-甲醇-水(6:3:1.5:1.5:0.3)为展开剂，置氨蒸气饱和的展开缸内，展开，取出，晾干。置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的黄色荧光斑点。阴性对照无此斑点。

2.2 当归薄层色谱鉴别

取(1)的乙醚溶液，挥去乙醚，残渣加乙酸乙酯0.5ml使溶解，作为供试品溶液。另取当归对照药材同法制成对照药材溶液；并同法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述3种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以正已烷-醋酸乙酯(9:1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。阴性对照无此斑点。

2.3 没食子薄层色谱鉴别

取本品粉未5g，加甲醇30ml，超声处理15min，滤过，滤液蒸干。残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取没食子酸对照品，加甲醇每1mg/ml的溶液，作为对照品溶液；并同法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版)试验，吸取上述3种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶GF254薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲酸(5:5:1)为展开剂，展开，取出，晾干。置紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。阴性对照无此斑点。

2.4 山茱萸薄层色谱鉴别

取本品粉未5g，加乙醚30ml，超声处理10min，滤过，滤液挥干。残渣加石油醚(30～60℃)30ml，摇匀，浸泡2min，倾去石油醚，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取熊果酸对照品，加甲醇制成1mg/ml的溶液，作为对照品溶液；并同法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版)试验，吸取上述3种溶液各50μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以环已烷-氯仿-醋酸乙酯-甲酸(20:5:8:0.2)为展开剂，展开，取出，晾干。喷以10%硫酸乙醇溶液，105℃烘至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。阴性对照无此斑点。

3 含量测量

3.1 色谱条件与系统适应性

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相:乙腈：水(15:85)，检测波长：240nm，流速：1.0ml/min，进样量：l0μ1，柱温：25℃。

3.2 对照品溶液的制备

精密称取马钱苷对照品适量，加甲醇制成马钱苷溶液40g/ml。

3.3 供试品溶液的制备

取本品适量，研碎，取约1.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，加热回流1h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液。

3.4 测定法

分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，以上述色谱条件测定，根据马钱苷峰面积值，计算供试品中马钱苷的含量。

3.5 标准曲线的制备

取马钱苷对照品约1mg，精密称定，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取2、4、8、10、12、15μl注入液相色谱仪，记录色谱图，以马钱苷进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程为：Y=42316．6090x-586.4188，r=0.9998 (n=6)。

3.6 阴性溶液的制备及试验

取缺山茱萸的阴性样品1g，按供试品溶液制备方法同法制备，即得。取马钱苷对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10L，分别注入液相色谱仪中，记录色谱图。结果马钱苷峰保留时间约为6min左右，阴性对照在相应位置上无干扰峰，理论塔板数按马钱苷峰计在3000以上。

3.7 精密度试验

精密吸取马钱苷照品溶液l0μl，注入液谱仪，连续进样6次，测定峰面积，结果RSD为0.85%。

3.8 重复性试验

取样品6份，按含量测定方法依法测定，结果RSD为1.20%，表明此方法重复性较好。

3.9 加样回收试验

精密称取已知含量的样品适量，共6份分别精密加入一定量的马钱苷对照品，按上述色谱条件测定，计算回收率，得平均回收率为98.66%，RSD为1.22%

4 讨论

4.1 本试验用TLC法对药品中的黄连、当归、五倍子、山茱萸进行了鉴别，其方法简便、快速、重现性好。

4.2 马钱苷为山茱萸的主要有效成分，具有明显的抗炎、调节免疫的功能[2]，用HPLC法测定了山茱萸中马钱苷的含量，经方法学考察，本法灵敏度高，重理性好。

[1]中国药典委员会.中国药典[M].北京:化学工业出版社,2005:174.

[2]赵武述,张玉琴,李洁,等.山茱萸成分的免疫活性研究[J].中草药,1990,21(3):113-116.

10.3969/j.issn.1009-4393.2010.19.110

473061 南阳市食品药品检验所 (张玉洁)