解脲脲原体感染动物模型的研究进展

陈传杰，朱国兴

广州中山大学附属第三医院皮肤性病科，广州510630

解脲脲原体(Ureaplasmaurealyticum，Uu)是女性泌尿生殖道黏膜中常见的微生物，可以是一种致病菌，也可以是一种共生菌，其致病性目前仍存在争议[1,2]。此外，Uu尚可在妊娠妇女和新生儿中分别引起绒毛膜羊膜炎和新生儿肺部疾病[3]。Uu感染动物模型的建立对研究Uu致病能力与机制，Uu血清型或基因型与疾病的关系，Uu感染与免疫以及该病原体所致尿道炎的治疗、药物疗效及毒性观察，疫苗研究等方面有重要意义。因此，既能真实模拟体内情况又易于建立的动物模型是非常有价值的。本文就国内、外Uu致病性及其感染动物模型研究的进展作一综述。

1 Uu下生殖道感染动物模型评价

Uu感染下生殖道后，临床可表现为尿道炎或宫颈炎，目前认为与性接触密切相关[4]，但对下生殖道的确切致病性仍有很大争议，临床研究结果不尽相同，甚至相距甚远。如Deguchi等[5]研究了572例男性尿道炎患者及141例男性健康对照者，Uu培养阳性率18%，与对照组的阳性率(7.8%)有显著差异；同时认为Uu生物2群与男性尿道炎的发生密切相关，而生物1群则以寄居形式存在于泌尿生殖道。Baka等[1]对153例有明显泌尿系统症状的女性患者进行临床分析，结果81例患者(52.9%)的尿道、阴道或宫颈中至少有1个部位检测出Uu，认为女性慢性泌尿系统症状与Uu存在密切联系。但Daxboeck等[2]研究了30例有泌尿系统感染症状的患者，发现仅有6例(20%)Uu阳性，提出泌尿系统支原体定植与泌尿系统症状并没有相关性。从以上及其他类似研究可看出，多数关于Uu致病性的研究来自临床，病例来源、对照选择、观察指标都有相当的不确定性，导致研究结果各异，甚至完全相反。进一步的研究需要有一个客观、有效的评价Uu致病性的方法，以排除临床干扰因素的影响。因此，Uu感染动物模型的优越性得以显现。

20世纪80年代，Furr等[6]成功建立了一个比较持久的Uu感染动物模型。选用8～10周龄的雌性小鼠(TO、CBA和BALB/c)，接种Uu前皮下注射雌二醇0.5 mg(0.1 ml)，隔周1次。第2次注射后将小鼠麻醉，用吸液管取50 μl Uu标准株8型(Uu8)菌液(CCU=5×106)注入阴道。结果显示，Uu能定植于接受雌二醇处理的小鼠生殖道，而不能在未经雌二醇处理的小鼠生殖道定植。Uu成功定植于小鼠阴道内21～163 d后被清除。部分小鼠Uu可上行定植于子宫角、卵巢和脾脏，但在咽喉、肾脏和肝脏未发现Uu定植。接受雌二醇处理的小鼠阴道分泌物中多形核白细胞(polymorphonuclear leukocyte，PMNL)数量很少或没有，而未接受雌二醇处理的小鼠在周期的不同阶段均可观察到不等数量的PMNL。Uu清除与阴道分泌物PMNL重新出现有关。Uu感染BALB/c小鼠后，对Uu再次感染无保护作用。Uu定植失败不能归因于完全抵抗，部分初次定植失败的小鼠第2次接种仍能成功定植。实验中小鼠阴道或其他部位的炎症反应不明显，但不排除这是由于接受雌二醇处理或Uu8型致病性较弱所导致的，作者认为雌二醇处理可能抑制了阴道局部免疫。研究发现，在TO、CBA、BALB/c小鼠中，BALB/c最易感染Uu8。该课题组于2002年建立了Uu5、Uu8、Uu10不同血清型的雌性小鼠下生殖道感染模型，认为Uu8型定植能力更强。同时发现Uu在体外多次传代对其致病性并无明显影响[7]。该课题组虽进一步明确了Uu下生殖道感染模型的建立方式，并对3种血清型的致病性进行了评价，但在确定3个血清型菌液浓度时并不一致，这可能影响评价结果。有研究者建立了多个支原体感染动物模型，发现孕酮可增强Uu感染生殖道的效果，且雌二醇的预处理必不可少，实验动物首选BALB/c小鼠。

2 Uu呼吸道感染动物模型评价

研究发现，Uu定植可使新生儿出现肺炎、支气管肺发育不良(bronchopulmonary dysplasia，BPD)、慢性肺部疾病，甚至引起死亡。虽然肺炎支原体在临床较为常见，但Uu定植新生儿引发BPD的概率更高[8]。也有学者持不同观点，认为Uu定植新生儿与肺部慢性疾病无明显关联[9]。

早期Rudd等[10]通过直接向C3H/HeN和C57BL/6N小鼠鼻腔注射含Uu(血清型1和10)的菌液，建立了新生小鼠Uu肺炎模型，为以后的新生儿肺部Uu感染动物模型提供了指导。2002年Viscardi等[11]成功地将来源于BPD早产儿呼吸道的0.1 ml Uu(生物2群，CCU=1×106)定植于C3H/HeN小鼠，而同样菌株在CD-1小鼠无法定植，使用标准株Uu3型也未能成功建立模型。该模型组织病理学方面的表现为呼吸道纤毛上皮脱失，与新生儿Uu肺炎一致。通过免疫组化方法进行准确定位，发现Uu定植于肺泡和终末支气管。实验早期，小鼠肺部肺泡支气管和间质的中性粒细胞明显增多，继而巨噬细胞增多；而在慢性阶段(14～28 d)，中性粒细胞和巨噬细胞在支气管灌洗液中再次增多。实验过程中发现，Uu感染小鼠的支气管肺泡灌洗液中肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor，TNF)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony-stimulating factor，GM-CSF)、白细胞介素10(interleukin 10，IL-10)等有升高趋势。研究认为，Uu在感染早期对支气管灌洗液中的细胞因子无明显刺激作用，而在慢性阶段可引起TNF、中性粒细胞和巨噬细胞增多。Uu在新生小鼠和人类感染中可致轻微的急性炎症，慢性气道炎症也可得以发展。主要是由于中性粒细胞和巨噬细胞聚集，可能改变以后吸入性致病原或炎症刺激所致反应。该模型的建立强调深度麻醉可避免吞咽导致的菌液不能顺利进入呼吸道等情况。2003年Yoder等[12]向怀孕狒狒羊膜腔内注射Uu菌液，建立了新生狒狒Uu致BPD动物模型。生产过程中感染Uu的狒狒羊膜腔液中的白细胞、IL-6、IL-8水平明显升高，组织学发现新生狒狒透明膜发生炎症反应。Uu阳性组的新生狒狒肺部灌洗液中IL-6、粒细胞总数和中性粒细胞水平在不同时间段均明显高于对照组。该研究发现，近50%早产狒狒在出生后1周内可自行清除呼吸系统的Uu，而不能清除Uu的早产狒狒则被视为早期肺功能紊乱和损伤的高危对象。2003年Benstein等[13]再次通过鼻内接种Uu菌液建立新生小鼠肺部感染模型，原位杂交技术发现感染Uu的小鼠肺组织中Uu定植于细支气管和肺泡上皮细胞及巨噬细胞，而Uu在巨噬细胞的定植是Uu导致肺部疾病的证据。

3 结语

目前关于Uu的致病性尚不完全清楚，仍存在异议，因此还需进一步对Uu致病性、相关疾病及治疗等方面研究。Uu感染动物模型的成功建立，为其深入研究提供了重复性强、可控性好的方法。该法简单、经济，可发挥重要作用。

[1] Baka S, Kouskouni E, Antonopoulou S, Sioutis D, Papakonstantinou M, Hassiakos D, Logothetis E, Liapis A. Prevalence of Ureaplasma urealyticum and Mycoplasma hominis in women with chronic urinary symptoms [J]. Urology , 2009, 74(1): 62-66.

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