HPLC法测定丹参调肝颗粒中丹参酮ⅡA的含量

刘丰贤，刘 江，周 鹏

（湖南师范大学医学院，湖南长沙 410013）

丹参调肝颗粒是长沙市方泰医院自主研制的中药治疗乙肝的处方，由丹参、白术、枳壳等12味中药组成。功能活血行气，调和肝脾。用于血瘀气滞，肝脾失和所致胁肋疼痛，腹胀便溏，神疲纳差，舌质紫暗或有瘀斑等，慢性乙型肝炎有上述见证者。本方以丹参活血祛瘀、清血热，除烦满为君药。因此测定丹参中的成分更能有效的控制样品质量，本实验采用HPLC法处方中丹参酮ⅡA的含量[1]，方法简单，结果可靠。

1 仪器与试剂

1.1 仪器

岛津LC-210ATvp型高效液相色谱仪，SPD-210Avp可见紫外检测器及浙大N3000双通道色谱工作站。

1.2 样品

长沙市方泰医院医疗机构制剂"丹参调肝颗粒"，批号(90021,900423,90906,91024,91217)。

1.3 试剂

对照品丹参酮ⅡA(TanshinoneⅡA，批号110766-200417)购自中国药品生物制品检定所。甲醇为色谱纯，水为屈臣氏蒸馏水重蒸馏。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：5μm，C18-MS-Ⅱ，4.6×250mm柱，检测波长：270nm，流速：1.00mL/min。流动相：甲醇-水(75:25)。

2.2 标准溶液配制

精密称取0.01005g置10mL量瓶，用甲醇稀释至刻度，轻轻振摇，使溶解，得标准品母液备用。

2.3 供试品溶液配制

取丹参调肝颗粒1包，研碎，过80目筛，取1g，精密称定，置50mL具塞锥形瓶中，加甲醇25mL超声30min，冷却，用甲醇补充损失重量，摇匀，滤过即得。

2.4 阴性样品溶液的制备

精密称取阴性样品1g，按供试品溶液的方法制成阴性样品溶液。

2.5 标准曲线的绘制

分别取 2.2项下的标准母液溶液 0.1mL、0.2mL、0.3mL、0.4mL、0.5mL、0.6mL稀释至1mL。得到浓度分别为0.1005 mg/mL、0.2010 mg/mL、0.3015 mg/mL、0.4020 mg/mL、0.5025 mg/mL、0.6030 mg/mL。分别注入高液色谱仪，进样量20 μL。以质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制表尊曲线，得回归方程。y=13561616.8x+310425.8，R2=0.9992，线性范围：2μg～12μg。

2.6 精密度试验

精密吸取标准品溶液（0.5025 mg/mL）20μL，连续进样6次。测定结果见表1。

表1 精密度试验(RSD为0.55)

2.7 稳定性试验

精密吸取供试品（090906）溶液20μL，分别在0、2、4、8、12、24h进样1次，测定结果见表2，供试品溶液24h内，丹参酮ⅡA稳定。

表2 样品稳定性试验(RSD为0.90)

2.8 加样回收率

取同一批样品090906一包，研磨，过80目筛，精密称取1g，加标准品溶液（0.0402mg/mL）25mL，制备成供试品液，精密吸取20μL，连续进样6次，测定结果见表3，平均回收率为99.3%。

表3 加样回收率试验(RSD为0.90)

2.9 样品测定

取三批样品，制成供试品溶液，分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性样品溶液20μL，进样测定，按回归方程计算丹参酮ⅡA的含量，结果见表4，色谱图见图1～3。

表4 5批样品中丹参酮ⅡA品含量

3 讨论

本文实验摸索了采用HPLC法测定丹参调肝颗粒中丹参酮ⅡA的含量。在提取方法的选择上，我们摸索了甲醇、乙醇以及不同浓度的含水醇等溶剂，用浸渍、回流和超声提取，经过反复试验发现本品用甲醇超声提取，供试液在24h内结果稳定。在流动相的选择上，我们试验了不同比例的乙腈-水、甲醇-水甲醇-水(75:25)，试验结果表明丹参酮ⅡA在甲醇-水(75:25)作为流动相，流速1mL/min时分离效果很好，理论塔板数达到34500。综上所述，本文所采用的方法简单、稳定、可靠，为制定该制剂的企业标准，进一步提升医疗制剂的质量标准做了有益的探索。

[1]中国药典2010年版一部[S].2010.70-71,附录36-38.