苦参素治疗慢性乙型肝炎患者T细胞亚群和细胞毒性T淋巴细胞的变化

顾锡炳 杨小娟 王 栋 朱银芳 丁 虹 张 波 徐月琴

氧化苦参碱具有抑制肝脏炎症，减轻肝纤维化，并有一定的抗病毒作用[1～3]。为进一步探讨苦参素治疗CHB患者细胞免疫功能的变化，我们观察了苦参素治疗前后患者T细胞亚群、细胞毒性T淋巴细胞（CTL）以及HBV DNA和HBeAg阴转率的变化。

对象与方法

一、研究对象 2006年1月至2008年12月在我院就诊的CHB患者66例，男49例，女17例，年龄20～56岁，平均36.3±10.3岁。诊断符合2000年西安会议制定的病毒性肝炎防治方案的标准[2]。入选标准：HBV DNA≥1×104copies/mL；HBeAg阳性；ALT≥2×正常值上限（ULN）。排除甲型、丙型、丁型和戊型肝炎病毒感染；无自身免疫性疾病史；无嗜酒史；无肝毒性药物应用史；未用过核苷（酸）类似物和干扰素等抗病毒药物或免疫调节剂。另选健康献血员30例，男22例，女8例，年龄20～56岁，平均年龄35.18±7.01岁为对照组。

二、治疗方法 将患者分为两组。治疗组首先给予苦参素葡萄糖注射液（江苏正大天睛药业公司）600mg静脉滴注，每日1次，1个月后改为苦参素胶囊（正大天睛药业公司）200mg口服，每日3次，治疗2个月。同时给予水飞蓟宾葡甲胺片200mg口服，每日3次，治疗3个月；对照组单用水飞蓟宾葡甲胺片，用法、用量同治疗组。

三、检测方法 采用日立7600全自动生化分析仪检测肝功能（日本协和试剂）；采用1235时间分辨荧光法检测HBV M（上海新波试剂）；采用PCR法检测HBV DNA（上海科华试剂）；采用流式细胞术检测T细胞亚群和CTL[取100 μl乙二胺四乙酸二钾抗凝新鲜全血加入检测管和对照管，分别加入单克隆抗体及同型对照10μl，室温避光孵育15 min，经溶血处理后上流式细胞仪（Beckman-Coulter 3XL，美国）检测（Beckman-Coulter公司试剂）]。

四、统计学处理 计数资料用x2检验，计量资料用t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

结 果

一、T细胞亚群和CTL的变化 患者在苦参素治疗3个月后CD3+、CD4+和CTL+细胞数较治疗前和对照组治疗后升高更明显（t=2.21～4.11，P＜0.05 或 P＜0.01）；CD4＋/CD8＋比值略高于治疗前（t=1.33，P＞0.05），但明显高于对照组治疗后（t=2.23，P＜0.05）；对照组在治疗 3 个月后，CD3＋、CD4＋、CD8＋细胞、CD4＋/CD8＋比值和CT L细胞与治疗前比较无明显差别（t=0.18-1.16，P＞0.05，表 1）。

表1 患者和正常对照组T细胞和CTL（，%）计数的变化

表1 患者和正常对照组T细胞和CTL（，%）计数的变化

例数 CD3＋ CD4＋ CD8＋ CD4＋/CD8＋ CTL治疗组 治疗前 33 68.85±7.31 33.61±7.3 28.99±7.90 1.23±0.41 18.11±5.21治疗后 72.47±5.14 37.81±5.0 29.02±7.54 1.39±0.35 21.46±4.53对照组 治疗前 33 68.72±6.93 33.46±7.27 28.88±7.62 1.24±0.43 18.05±5.06治疗后 67.51±5.2 32.58±5.52 28.69±5.31 1.17±0.33 17.63±3.56正常对照 30 68.83±5.5 37.21±6.09 25.13±4.78 1.54±0.43 15.83±4.99

二、HBV DNA和HBeAg阴转情况 治疗组治疗3个月后，HBV DNA 阴转（HBV DNA＜500copies/m l）10 例（30.30%），高于对照组治疗后的 2例（6.06%，x2=6.53，P＜0.05）；HBeAg阴转8例（24.24%），高于对照组治疗后的1例（3.03%，x2=6.3，P＜0.05）；两组均无HBeAg血清学转换。

三、肝功能恢复情况 治疗组治疗3个月后ALT恢复正常29例（87.88%），对照组28例（84.85%，x2=0.13，P＞0.05）。

讨 论

苦参素的抗病毒作用主要是抑制细胞分泌HBsAg和HBeAg，调节免疫，刺激机体产生干扰素等[3，4]。据报道，应用苦参素治疗 CHB 患者后外周血 CD3＋、CD4＋、CD4＋/CD8＋比值较治疗前明显提高[5]。实验表明，在苦参素作用后，HBsAg转基因小鼠体内成功地诱导出Th1型细胞因子的分泌[6]。本文两组CHB患者治疗前CD4＋低于正常对照组，CD8＋高于正常对照组，CD4＋/CD8＋值低于正常对照组，说明CHB患者存在细胞免疫功能紊乱和低下，是导致CHB患者HBV不能被清除的重要原因。在苦参素治疗3个月后，CD3＋、CD4＋和CTL细胞均较治疗前升高，与王啸报道类似[5]。HBV DNA和HBeAg阴转率也高于对照组，与报道类似[7]。

[1]何盛华，张济万，陈强，等.苦参素治疗慢性乙型肝炎80例疗效观察[J].四川医学，2005，26（10）：1090.

[2]中华医学会传染病与寄生虫病学分会和肝病学分会.病毒性肝炎防治方案[J].中华肝脏病杂志，2000，8（6）：324-329.

[3]陈小松，王国俊，蔡雄，等.氧化苦参碱对肝纤维化大鼠细胞因子表达水平的影响[J].实用肝脏病杂志，2006，9（5）：257-259.

[4]陆伦根，曾民德，茅益民，等.氧化苦参碱胶囊治疗慢性乙型病毒性肝炎随机、双盲、安慰剂对照多中心临床研究[J].肝脏，2002，7（4）：218-221.

[5]王啸，董香玉，朱传安.苦参素对慢性乙型肝炎外周血T淋巴细胞亚群的影响[J]. 临床荟萃，2001，16（18）：841.

[6]董宇红，席宏丽，田枫，等.苦参素对HBsAg转基因小鼠血清Th1和Th2细胞因子水平的影响[J].中华实验和临床病毒学杂志，2004，18（3）：277-280.

[7]胡石江，朱绍咏.苦参素治疗HBeAg阳性慢性乙型肝炎疗效观察[J].临床肝胆病杂志，2004，20（2）：118-120.