淫羊藿超声提取工艺优化

高 冷，鲍 磊，王谷媛，龚殿鹏

（长春工业大学 化学与生命科学学院，吉林 长春 130012）

淫羊藿具有补肾阳、强筋骨、祛风湿之功效[1]。现代研究表明，其有效成分主要为淫羊藿苷、总黄酮及多糖[2],具有多方面的药理作用。临床应用广泛[3],淫羊藿苷是淫羊藿的主要有效成分,分子式为C33H40O15，分子量676.75，结构式如下：

本文以淫羊藿苷的提取率为指标,通过正交实验分析各因素对提取率的影响，优选出较佳的超声提取工艺条件，以促进淫羊藿的进一步合理开发利用。

1 实验部分

1.1 仪器、原料及药品

SCIENT2-HF2000超声波循环提取机；Agilent1100高效液相色谱仪；LGJ-30冷冻干燥机；DK-S26型电热恒温水浴锅；GL-21LM型离心机；R501型旋转蒸发器；索氏提取器；电子天平。

长白山淫羊藿叶；淫羊藿苷标准品；乙醇（A.R.）；蒸馏水；甲醇（色谱纯）。

1.2 正交实验设计[4]

称取干燥的淫羊藿粗粉20g，过40目标准筛，用乙醇作溶剂超声提取,得到的粗提液进行旋转蒸发至200mL，离心后冷冻干燥至干,干燥至恒重,得粗提物。超声功率达到300W以上时提取率趋于恒定，故选定乙醇体积分数（A）、液固比（B）、提取温度（C）、提取时间（D）作为考察因素,每个因素各取3个水平,采用L9（34）正交表进行实验。

1.3 淫羊藿苷样品溶液的配制

称取10 mg干燥的粗提物,置50mL容量瓶中加入40mL甲醇,超声溶解10 min定容。取部分溶液离心吸取上清液,用微孔滤膜（0.45um）过滤取续滤液作为样品溶液备用。

1.4 HLPC检测方法

1.4.1 HLPC标准溶液的制备 照2005版药典如下操作:精密称取淫羊藿苷标准品5mg，置于50mL容量瓶中，加入甲醇，超声加热使其充分溶解，并稀释至刻度，摇匀，制成每lmL含0.lmg的溶液，即得标准对照溶液。

1.4.2 HLPC测定条件及方法[5,6]流动相的选择：经过流动相的选择与优化，发现甲醇∶水（60∶40）的流动相分离完全，保留时间适宜，其他成分分离较好，无干扰，选定为适宜流动相；色谱柱ZORBAX SB-C18；保留时间15min；以淫羊藿苷为标品在波长270nm进行测定。最后进行色谱分析：取5μL标准溶液及试样提取液进高效液相色谱分析，以保留时间定性，用峰面积外标法定量计算试样中物质含量。

1.4.3 HLPC标准曲线的制备 精密量取1.4.1项下标准溶液 0.00、0.50、1.00、1.50、2.00、2.50、3.00mL分置于 10mL刻度比色管中（相当于 0、5、10、15、20、25、30μg·mL-1）分别加甲醇定容至刻度，摇匀；在270nm波长处做HPLC检测，并计算回归峰面积。以峰面积对浓度做回归处理，5～30ug·mL-1范围内呈良好的线性关系，并得到回归方程为:Y=192.22X-12.153，R2=0.9983。

1.4.4 淫羊藿的HLPC图谱

图1 淫羊藿标准样的HLPC图谱Fig.1 HLPC chromatogram of herba epimedii standard sample

图2 淫羊藿超声最佳工艺提取物HLPC图谱Fig.2 HLPC chromatogram of extractive of herba epimedii by best technology

由图1、2可以看出，提取物和标准品的保留时间相同，证明所提取的物质是淫羊藿苷。

1.5 淫羊藿叶中淫羊藿苷总含量测定

称取20 g干燥的淫羊藿粗粉3份,分别在索氏提取器中用甲醇回流提取,直至提取液无颜色为止,提取液减压浓缩、冷冻干燥至恒重,得粗提取物。其质量取3次的平均值为4.42g。按1.4项步骤配制样品溶液,取3次结果的平均值,得淫羊藿中淫羊藿苷的含量为2.98%,偏差为0.01。

1.6 提取率的计算

淫羊藿苷的提取率=样品中淫羊藿苷检测含量/淫羊藿叶中淫羊藿苷总含量。

1.7 验证实验

根据筛选得到的最佳工艺提取3批样品,测定淫羊藿苷含量。

2 结果与讨论

2.1 淫羊藿苷提取

正交实验结果与极差分析见表1，方差分析见表2。

表1 正交试验结果Tab.1 Results of orthogonal test

表1结果表明，对淫羊藿苷提取率影响的主次因素为乙醇浓度（A）＞液固比（B）＞提取时间（D）＞提取温度（C）,最佳提取工艺条件是A2B3C1D2,即60%乙醇溶液、液固比25∶1、提取时间60min、提取温度50℃,在此条件下淫羊藿苷的提取率为94.98%。

表2 方差分析Tab.2 Analysis of variance

表2结果表明，因素A、B对实验结果影响显著,因素C、D则对实验结果影响较小。

2.2 验证实验结果

实验结果表明,通过正交试验优化得到的工艺条件稳定可行,平均提取率为94.88%。

2.3 淫羊藿最佳提取工艺

超声功率为300W、60%乙醇溶液、液固比25∶1、提取时间60min、提取温度50℃。根据优选工艺验证实验表明,有效成分提取率94.88%,重现性较好。

3 结论

超声波对固体样品的提取效果很明显，它促进和加速了提取过程，而且还可避免高温对目标成分的破坏,目标物易分离，能达到比常规提取更理想的效果。超声提取方法较其它常规提取方法具有提取时间短、提取温度低、提取率提高明显的优点，更适合于大规模生产的需要。

［1］中华人民共和国卫生部药典委员会.中国药典（2005版）［M］.广州:广东科技出版社，2005.287.

［2］王昌林，李星，王奥新.淫羊藿及其有效成分的药理研究概况［J］.中国中药杂志，1998，23（3）:183.

［3］Wang Y P，Guo B L.Quantitative analysis of total flaxonoids and icariin in Xianling Gubao Capsule［J］.Chin.Tradit.Herb.Drugs.，2005，31（5）:341-342.

［4］卢泓，庄珂.正交设计优选淫羊藿提取工艺研究［J］.长春中医学院学报，2004，20（3）:36-38.

［5］马小琼，王龙星，徐青，等.人参皂试的反相高效液相色谱多台阶梯度优化方法［J］.高等学校化学学报，2004，25（2）:238-242.

［6］杨戒骄.柱层析-高效液相色谱法测定乳增宁片淫羊藿苷含量［J］.中国药房，2004，15（9）:565.