光阻法检查注射液中不溶性微粒影响因素分析

吕长淮，吴 玮，胡 丹

（安徽省宿州市药品检验所，安徽宿州 234000）

不溶性微粒指除气泡外可流动的、随机存在于液体制剂包括灭菌粉针剂所制成的液体中的不溶性外来物质。不溶性微粒检查指检查静脉用注射剂（溶液型注射液、注射用无菌粉末、注射用浓溶液）及供静脉注射用无菌原料药中不溶性微粒的大小及数量[1]。检查注射液中不溶性微粒的方法主要有显微计数法和光阻法。《中国药典》2000年版将光阻法收录作为检查注射液中不溶性微粒第二法，用以检查100 ml以上注射液，2005年版将其改为第一法，作为注射液中不溶性微粒检查的首选方法，适用范围扩大为100 ml以下小容量注射液及注射用无菌粉末，2010年版将适用范围进一步扩大至供静脉注射用无菌原料药。光阻法具有操作简单、快速、灵敏、自动化及智能化程度高、取样体积准确等特点，是目前注射液中不溶性微粒检测较为先进的技术，被各国药典广泛收录作为控制注射液质量的重要方法。在近年来的应用研究中发现，光阻法检查注射液中不溶性微粒过程中存在诸多影响因素，现对其影响因素作一归纳概述，以便在标准修订时参考，使检测方法更趋合理完善。

1 取样方式的影响

光阻法检测注射液中不溶性微粒的取样方法，《中国药典》2005年版和2010年版规定：25 ml及25 ml以上的注射液，采取直接倾注法检测；25 ml以下的注射液，采取直接取样或合并取样；对于注射用无菌粉末和黏度大的注射液可稀释后再测定。

1.1 小容量注射液全体积取样方式的影响

小容量注射液全体积取样法（单支直测法）能观察每支情况，污染机会少，可考察多支安瓿检查结果的重现性，体现出瓶间差异，但实际操作中存在以下影响因素。①全体积取样时，第一瓶或前几瓶的读数应弃去，至少需5~10 ml，使管道被所测样品充满，有些样品与管道中水相混的过程可能会产生气泡、乳光等现象，使测定数据偏高。②对于一些水溶性差的样品，如果用全体积法测定，样品在管道中与水相混时，可能会在局部析出沉淀，不仅使测定结果偏高，甚至造成管路堵塞。③全体积取样操作较难控制，暂停键按慢了，管路吸入空气，使结果偏高；暂停键按早了，样品不能完全抽取，结果偏低[2]。④小体积注射液全体积取样时，偶有剂量不足或取样头位置离开液面等原因造成管内有气泡产生。⑤某些安瓿底部中间突起，全体积取样时，须将取样针沿安瓿壁插入底部，尽可能多地抽取溶液，一般每支测定时总要剩下0.1 ml药液，取样针可保留0.3~0.4 ml的样品，再加上瓶内残存的死体积，对于1 ml、2 ml等小规格的样品，全体积取样几乎不可能实施，操作不当即可吸入气泡[3]。⑥安瓿在割锯掰开时，会大量引入微粒[4]，在开启瓶口时，瓶口会有碎玻璃屑或粉尘落入瓶中，使测定数据偏高。

1.2 小容量注射液合并取样方式的影响

对于1 ml、2 ml等小规格不宜采用全体积取样的样品，采用合并取样时也存在影响因素。①小规格注射液合并取样时取样量大，用砂轮割锯安瓿会大量增加微粒，实际操作中，如果割锯后直接掰开，会大量引入微粒，使测定数据偏高。尽管在用砂轮割锯安瓿后用微粒检查用水淋洗划痕，在安瓿掰开时，仍会有玻璃屑或粉尘落入安瓿内，使测定数据偏高。②合并取样体积在30 ml以下测量时，因药液量少，搅拌器露出水面将气泡带入探头中，使测值出现异常[5]。

2 仪器对测定的影响

微粒检测仪器自身也存在干扰因素，如微气泡、静电凝集等均可产生假性微粒[6]。注射用粉针剂用纯净水溶解后，用两台仪器分别测定，结果差异较大，可能与仪器的传感器分辨率、微粒计数的准确性等因素有关[7]，还可能与仪器设计原理、仪器光路以及仪器的标定有关[8]。

3 其他影响因素

3.1 颜色的影响

部分颜色较深的注射液光阻法测定其不溶性微粒计数结果偏高，可能是由于光束无法穿透深色样品池，如复方丹参注射液和当归注射液，但用显微计数法测定计数结果相对较低[9]。

3.2 黏度的影响

黏度大的注射液也会影响测定，直接测定会造成仪器管路堵塞，应用纯化水或适宜溶剂稀释后测定。

3.3 析出结晶的影响

易析出结晶的注射液，易堵塞管路，也不适宜采用光阻法测定。邱逢钢等[10]探讨用光阻法测定甘露醇注射液不溶性微粒，测定时将甘露醇注射液在30℃水浴上加热20 min，使药液温度保持在25~30℃，再采用光阻法检测，可以克服测试过程中因析出结晶发生微孔管堵塞，使测定顺利进行，为易析出结晶注射液的测定提供了可行的方法。

3.4 搅拌速度

药液的搅拌速度对测定结果也有影响，而且不同品种影响程度不同[11]。

4 结语

光阻法作为检测注射液中不溶性微粒的主要方法，已显示出其优越性；但由于存在如上所述的影响因素，使得检测结果有时会有偏差，适用范围有一定的局限性。所以《中国药典》2005年版和2010年版虽然将光阻法作为首选方法，但仍保留了显微计数法，当光阻法测定结果不符合规定或供试品不适于用光阻法测定时，应采用显微计数法进行测定，并以显微计数法的测定结果作为判定依据，保证了检测结果的准确性。

正因为光阻法检测注射液中不溶性微粒存在诸多干扰因素，使其研究领域和范围不断向纵深拓展，采用统计学手段对小容量注射剂不溶性微粒测定结果进行分析，可获知其不溶性微粒污染的统计学特征，从而有助于在整体上了解小容量注射剂不溶性微粒污染的现状[12]。对注射液[13]和注射用无菌粉末[14]不溶性微粒光阻法检查结果进行不确定度分析，以找出影响不确定度的因素。随着光阻法技术应用研究的深入，影响测定的因素会逐步得到解决，光阻法检测注射液中不溶性微粒这一先进技术在控制静脉用注射剂质量上将会发挥越来越重要的作用。

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