超声法制备酮康唑β-环糊精包合物的工艺优选

朱美红,陈 霞,倪巧云

酮康唑 (Ketoconazole,KCZ)对多种不同类型的念珠菌、皮肤真菌、酵母菌和其他致病真菌有较强的抑制作用。但由于其不溶于水且结构中有酰胺基和醚基,化学性质不稳定,易氧化变色。β-环糊精包合物可用于改善难溶性药物的溶解度和溶出度,掩盖药物不良臭味和降低刺激性,提高药物的稳定性等[1]。故采用包合技术,将酮康唑制成β-环糊精包合物,从而改善其物理特性,增加其稳定性。

1 材料

TU-1901双光束紫外可见分光光度计 (北京普析通用化器有限责任公司);KQ-250D E型数控超声波清洗器 (昆山市超声仪器有限公司);真空泵(天津奥特赛恩斯仪器有限公司);AX205电子精密天平 (上海梅特勒-托利多仪器有限公司)。酮康唑 (南京白敬宇制药有限责任公司,批号: 060406,含量:100%);β-环糊精 (国药集团化学试剂有限公司,批号:F20080418),其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 正交实验设计

2.1.1 β-CD包合物制备工艺 精密称取一定量β-CD,加入纯化水,超声使成饱和溶液。另精密称取一定量酮康唑,用甲醇溶解,超声下将其缓缓滴入β-CD饱和溶液中,超声处理一定时间,放冷至室温,然后放入冰箱中冷藏 24h,抽滤,固体物先用甲醇洗涤,再用纯化水洗涤,抽干,干燥得酮康唑-β-CD包合物,称重。

2.1.2 因素及水平 选择β-CD与酮康唑的比例(A)、包合温度(B)、包合时间 (C)为考察因素,每个因素设置 3个水平,见表 1,按 L9(34)进行正交实验。

表1 因素水平表

2.1.3 包合率测定与计算 以酮康唑的包合率为考察指标筛选最佳工艺条件。以下式计算包合物包合率:药物包合率 =(包合物中含酮康唑量/酮康唑投入量)×100%。

2.2 包合物中酮康唑的含量测定

2.2.1 贮备液制备 精密称取酮康唑 54.5 mg置100 mL量瓶中,用无水乙醇稀释至刻度,摇匀。

2.2.2 吸收波长选择 分别将酮康唑、β-环糊精及酮康唑β-环糊精包合物的乙醇溶液在 190～420 nm波长范围进行紫外扫描,酮康唑溶液在245 nm波长处有最大吸收峰,酮康唑β-环糊精包合物与酮康唑的最大吸收波长一致,而β-环糊精在此无吸收,故选择 245 nm为检测波长。

2.2.3 标准曲线 精密吸取酮康唑贮备液 0.5、 1.0、1.5、2.0、2.5 mL至 50 mL量瓶中,加乙醇定容,使每 1 mL含 5.45、10.90、16.35、21.80、27.25 μg酮康唑,以乙醇为空白,在 245 nm处测定吸光度值,以浓度 C对吸光度 A回归得酮康唑溶液的标准曲线方程为 A=0.031 1C+0.025 6(r= 0.999 1,n=5)。

2.2.4 回收率试验 配制一定浓度的酮康唑乙醇溶液,加入适量的β-CD,按“2.2.3”项下方法测定吸收度,求回收率。平均回收率为 96.63%, RSD为 0.08%(n=5)。

2.2.5 精密度试验 按线性范围分别配制高、中、低 3种浓度的酮康唑乙醇溶液,按“2.2.3”项下方法测定。日内精密度 RSD分别为 0.06%、0.05%、0.03%(n=5)。

2.2.6 样品测定 精密称取包合物样品约 5 mg,用无水乙醇定容至 25 mL,超声使之溶解,在245 nm波长处测定吸光度,利用回归方程计算样品溶液的浓度,求出包合物中的酮康唑含量。

2.2.7 正交试验结果 酮康唑β-CD包合工艺条件筛选的正交试验结果见表 2,对实验结果进行方差分析,结果见表 3。

2.2.8 直观分析 极差 R确定主次因素顺序: B>A>C,因此,B为主要因素,对结果有较大的影响;A为次要因素;C因素的影响最小。因此,可以确定A3B3C2为较优处方工艺条件。即处方为主客分子比为 1∶5,用甲醇做溶媒,50℃下超声40 min为宜。

表2 正交试验结果

2.2.9 验证实验及包合物的鉴定 依照 A3B3C2处方重复 5次,以进一步验证处方工艺的合理性,结果制得样品的包合率均值为 60.37%。均高于试验设计中 9种处方工艺。包合物的鉴定:用紫外分光光度法。将酮康唑及酮康唑β-环糊精包合物乙醇溶液在 190～420 nm波长范围进行紫外扫描,比较二者的紫外扫描图谱。结果可见,酮康唑和酮康唑β-环糊精包合物的吸收图谱完全一致,说明主药未发生化学变化,而是通过物理包合作用形成了包合物。紫外扫描图谱见图 1。

图1 酮康唑、β-环糊精、酮康唑β-环糊精的包含物的紫外扫描图谱

电镜观察:分别对酮康唑、β-环糊精及酮康唑β-环糊精包合物进行电镜观察,并对观察结果进行比较。酮康唑β-环糊精包合物与酮康唑和β-环糊精的晶形均不相同,说明有新的包合物生成。

3 讨论

制备时采用甲醇作为酮康唑的溶解剂,而未采用毒性相对小的乙醇,是由于酮康唑在甲醇中溶解[2],而在乙醇中微溶,处方量酮康唑无法在乙醇中完全溶解。因此,在制备包合物时,先用甲醇将酮康唑溶解,在包合物制备完成后,可用甲醇洗去未被包合的酮康唑,然后用水洗去包合物表面的甲醇。本实验采用了超声波技术,是因为采用超声波技术有利于包合物的形成[3]。本实验所用超声波的功率为 250 W,为该 KQ-250DE型数控超声波清洗器的最大功率。在相同条件下,使用该功率所得包合率略高于其他功率。

制备的酮康唑β-环糊精包合物为白色无味的粉末,性质稳定,不易氧化,形成包合物后,水中溶解度比原料增加约 30倍。超声法制备酮康唑β-环糊精包合物具有时间短、设备少、工艺简单等优点。该包合工艺方法简便,宜于医院开展。

[1] 陆彬.药物新制剂与新技术[M].北京:人民卫生出版社, 2000:34-36.

[2] 中国药典.二部[S].2005:801-802.

[3] 国家食品药品监督管理局执业药师资格认证中心.药学专业知识[M].北京:中国医药科技出版社,2008:208.