胃癌组织中Survivin蛋白表达及临床意义研究

鲁 凯， 刘燕文， 朱正秋

胃癌是常见的恶性肿瘤，其发病率及死亡率居全国恶性肿瘤第二位[1]。有文献报道，胃癌5年生存率只有5%～20%[2]，严重威胁人类的健康，其远处转移和局部复发是生存率低的主要原因。survivin是一个新克隆的细胞凋亡抑制基因，近年研究提示其可引起肿瘤细胞凋亡的丧失并参与肿瘤的恶性转化，是预后不良的因素之一。本文通过检测Survivin蛋白在胃癌组织中的表达情况以了解其临床意义。

1 对象与方法

1.1 研究对象

收集我院2006—2007年手术切除的胃癌石蜡标本46例及完整临床病理资料，所有患者术前均经胃镜病理确诊且未行化疗。男性27例，女性19例；年龄39～78岁，平均61岁。胃体癌+胃窦癌28例，食管-胃结合部癌18例。组织分型(按WHO胃癌组织学分型标准)：黏液腺癌41例，印戒细胞癌5例。分化程度：高中分化21例，低分化及未分化25例。TNM分期(按UICC分期标准)：Ⅰ+Ⅱ期17例，Ⅲ+Ⅳ期29例；有淋巴结转移35例，无淋巴结转移11例。高危因素按胃癌NCCN2008指南标准：有高危因素36例，无高危因素10例。高危因素包括：肿瘤低分化，组织学分级高，脉管浸润，切除淋巴结数<15枚，切缘阳性。

1.2 方法

1.2.1 石蜡切片 常规脱蜡梯度水化后,加入内源性过氧化物酶抑制剂，室温孵育以阻断内源性过氧化物酶，PBS(pH 7.2)振洗后置pH 6.0柠檬酸中微波抗原修复,滴加正常动物非免疫血清封闭非特异性抗原，倾去血清，依次滴加一抗4℃过夜，生物素标记的二抗37℃ 15 min，滴加链霉素抗生物素蛋白-过氧化酶37℃ 15 min，PBS振洗后显色，流水冲洗终止反应,以苏木素复染,脱水透明封固，0.3%甲醇双氧水去除内源性过氧化物酶。

1.2.2 免疫组化染色 采用链霉菌素-生物素(SP)免疫组化技术，一抗Survivin羊抗人多克隆抗体(sc-8806),Survivin试剂为即用型。实验步骤按试剂盒说明书进行，将已知的胃癌阳性切片作阳性对照，用PBS代替一抗作阴性对照。

1.3 结果判定

阳性为细胞浆呈棕黄色颗粒，结果以阳性细胞所占百分比表示。光镜下(40倍)随机抽取10个视野，每个视野计数100个细胞，取其均值，阳性细胞数<25%为(-)，25%～50%为(+)，51%～75%为(++)，>75%为(+++)。

1.4 统计学处理

采用SPSS 11.0统计软件对数据进行处理。组间分析采用χ2检验。P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

Survivin蛋白在胃癌中的阳性表达率为50.00%，其中低分化及未分化(13/25，59.09%)高于高、中分化(10/21，47.62%)，但差异无统计学意义(P>0.05)。黏液腺癌(23/41，56.10%)高于印戒细胞癌(0/5，0)，食管-胃结合部癌(10/18，57.89%)高于胃体及胃窦癌(13/28，46.42%)，TNM分期Ⅲ、Ⅳ期(17/29，58.62%)高于Ⅰ、Ⅱ期(6/17，35.29%)，有淋巴结转移者(22/35，62.85%)高于无淋巴结转移者(4/11，36.36%)，有高危因素者(21/36，58.33%)高于无高危因素者(2/10，20.00%)，差异均有统计学意义(P<0.05)(见表1)。

表1 Survivin表达与胃癌病理特点的关系

3 讨论

凋亡抑制蛋白家族(ihibitor apoptosis family of protein, IAP)是近年来发现的一类新的细胞凋亡抑制蛋白,在进化过程中高度保守，与其他IAP相比，Survivin只在胚胎及肿瘤组织中表达，在正常成人分化组织中(胸腺、生殖器除外)检测不到[3]。近年来，对Survivin的分子生物学、组织分布特征、凋亡抑制机制及其与肿瘤的发生、发展的研究已取得了一定进展，也是目前发现的凋亡抑制作用最强的因子之一，并参与肿瘤的恶性转化及侵袭，也是提示预后不良的因素之一。

本研究结果显示Survivin蛋白在胃癌中的阳性表达率为50.00%，其阳性表达率在TNM分期Ⅲ、Ⅳ期患者中高于Ⅰ、Ⅱ期患者，有淋巴结转移者高于无淋巴结转移者，有高危因素的高于没有高危因素的(均P<0.05)。Survivin高表达提示癌细胞的侵袭能力及增殖能力增强，更易侵袭周围组织而发生转移，与淋巴结转移及高危因素密切相关，同时与疾病的进展密切相关。Li等[4]发现Survivin过度表达可以加速细胞周期的S期转换，抑制G1期，并激活Cdk2/CyclinE复合物，导致Rb蛋白磷酸化，从而启动有丝分裂，通过有丝分裂促进转化的肿瘤细胞异常增殖。Survivin通过抑制肿瘤组织中正常细胞的凋亡，促进癌细胞的增殖，进而增强癌细胞的侵袭能力，使其更易侵袭周围组织而发生转移。由Survivin等凋亡抑制基因过度表达引起的凋亡调控机制失常而发生凋亡受阻，对于癌细胞增殖和转移无疑是十分重要的。Zembowicz等[5]定量分析Survivin蛋白发现其与软组织肉瘤肿瘤分级及侵袭性显著相关，而Tkegnchi等[6]和Tanaka等[7]分别在食管癌和乳腺癌研究中指出Survivin阳性表达患者的5年生存率低于阴性表达者，提示Survivin是预后不良标志之一。

食管-胃结合部癌是指在食管下段复层鳞状上皮与胃的单层柱状上皮呈锯齿状交界处(Z形线)，即贲门部附近发生的癌。本研究结果显示食管-胃结合部癌Survivin阳性表达率为57.89%，而胃体及胃窦癌Survivin阳性表达率为46.42%，P<0.05，与傅仲学等[8]指出由于其病变部位的特殊性，预后远不及胃窦部的观点一致。有文献报道此部位切除术后5年生存率比食管癌和胃窦癌低1倍，1年生存率仅55%，提示食管-胃结合部癌预后较胃体及胃窦癌差，分析其原因可能由于食管-胃结合部癌基因表型为A/A型与胃体及胃窦癌G/G、G/A型不同，由此导致对化疗的敏感性不同。Liu等[9]在铂类相关基因与胃癌含铂化疗预后的关系研究中指出A/A型对化疗的敏感性降低，预后较G/G、G/A型差。

本研究结果显示低分化及未分化癌组织Survivin表达率高于高、中分化癌，但差异无统计学意义。分析其原因可能由于样本分类存在偏差，组织分型中印戒细胞癌只有5例，同时组织类型与恶性肿瘤细胞的起源及肿瘤细胞的排列方式、细胞异型程度密切相关，当组织恶变后，细胞的多种表型又回到胚胎细胞的表型，是肿瘤细胞所固有的特点，而与肿瘤的进展程度无关。Survivin只在胚胎及肿瘤组织中表达，Lu等[10]用免疫组化法分析了174例Ⅰ～Ⅲ期胃癌，其中60例Survivin在肿瘤组织中表达阳性，癌旁组织表达阴性。毕青等[11]报道Survivin在肿瘤组织中高表达，而在癌旁组织表达阴性，其高表达与肿瘤大小、组织类型、分化程度等恶性生物学行为无关。说明Survivin与胃癌的发生无关，而与疾病进展密切相关，是提示预后不良的因素之一。

以上研究表明，Survivin蛋白表达与肿瘤的发展及病情进展相关，且其高表达提示肿瘤的不良预后，提示Survivin是一个有潜在价值的肿瘤标志，与肿瘤预后密切相关，可作为预测肿瘤预后的新标志。

[1] 孙燕.内科肿瘤学[M].北京：人民卫生出版社，2003：549-551.

[2] 汤钊猷.现代肿瘤学[M].上海：上海医科大学出版社，2000：710-712.

[3] 刘燕文，姚壮凯，鲁凯，等.Survivin基因在胃癌中的表达及临床意义[J].中国肿瘤外科杂志，2009，1(6)：360-361.

[4] Li F, Ackermann EJ, Bennett CF, et al. Pleiotropic cel division defects and apotosis induced by interfrence with surviving function[J]. Nat Cell ,1999,1(8):461-466.

[5] Zembowicz A, Tang JL, Wu KK. Transcriptional Induction of Endothelial Nitric Oxide Synthase Type III by Lysophosphatidylcholine[J]. J Biol Chem, 1995, 270(28):17006-17010.

[6] Ikeguchi M, Kaibara N. surviving messenger RNA expression is a good prognostic biomarker for oesophaged carcinorma[J]. Br cancer, 2002,87(8):883-887.

[7] Tanaka K, Iwamoto S, Gon G, et al. Expression of surviving and its relationship to loss of apoptosis inbreast carcinomas[J]. clin cancer res, 2000, 6(1):127-134.

[8] 傅仲学, 韩文妙. 食管胃结合部癌的外科治疗[J].腹部外科, 2001, 14(5)：263.

[9] Liu B, Wei J, Zou Z, et al. Polymorphism of XRCC1 predicts overall survival of gastric cancer pations receiving oxaliplatin-based chemotherapy in Chinese population[J]. Eur J Hum Genet, 2007,15(10):1049-1053.

[10] Lu CD, Altieri DC, Tanigawa N. Expression of a noval antiapoptosis gene, surviving, correlated with tumor cell apoptosis and p53 accumulation in gastric carcinomas[J]. Cancer Res,1998,58(9):1808-1812.

[11] 毕青, 季峰, 王开明. survivin基因在人胃癌中表达的研究[J].浙江预防医学,2005,17(6)：8-10.