血清ａ－Ｌ－岩藻糖苷酶活性测定试剂的应用

郭秀碧

【摘要】目的：本文对血清a-L-岩藻糖苷酶活性测定试剂的应用进行性能评价。方法：采用对血清AFU活性进行测定并进行方法学的评价试验。结果:该试剂精密度好，批内CV<2.2％，批间CV<2.4％。三酰甘油≤5.0mmol/L、Hb≤2.5g/L、胆红素≤500μmol/L、VitC≤10g/L时经配对差异比较，均无显著干扰(P<0．05)；抗凝剂中EDTA.K2、草酸钠对检测无明显干扰，而肝素使AFU测定假性增高。与进口同类产品比较，y=0.9813x-0.3746，r=0.9991，两者相关性良好。结论：该试剂为液体试剂，采用速率法测定，使用方便、反应快速、结果准确，抗干扰能力强，适用于全自动生化分析。

【关键词】a-L-岩藻糖苷酶；速率法；性能评价

【中图分类号】R446.61【文献标识码】A【文章编号】1007-8517(2009)12-0050-01

a-L-岩藻糖苷酶(a-L-Fucosidase，AFU)的分类名为a-L-岩藻糖苷酶水解酶(EC3．2．1．51），催化岩藻糖苷键水解，参与含岩藻糖的低聚糖、糖肽、糖蛋白和糖脂的分解代谢。近年来随着对AFU的深入研究发现，AFU对某些疾病的发生、发展均具有重要临床意义。［1］

1原理

底物MPT-AFU在血清样本中a-L-岩藻糖苷酶酶作用下，生成产物MPT，而产物CPNP的生成量与样本中AFU的酶活性成正比，通过测定黄色产物MPT在340nm波长的生成速率，即可计算出样本中AFU的活性。

2材料与方法

2.1样本我院临床新鲜血清标品。

2.2仪器和试剂AFU检测试剂盒由浙江伊利康生物技术有限公司生产，批号080501。进口原装AFU检测试剂盒购自美国，批号F0806A；仪器为日立CX5全自动生化分析仪、抗坏血酸、胆红素、人胎盘a-L-岩藻糖苷酶均购自sigma公司，血红蛋白标准品购自上海血液中心。试剂上机参数均由浙江伊利康生物技术有限公司提供。

2.3测定方法HITACHI CX5自动分析仪参数反应类型：Rate-A法；反应温度：37℃；波长：(主)340/(次)405nm；样本：25μl，试剂250μl，读点时间6-12点。

3实验结果

3.1精密度评价按NCCLS评价方案，取低、中、高三个不同浓度的AFU样本，浓度分别为25U/L、68U/L、235U/L，上、下午双份测定，连续测定20d，再每天测1次，共测20d，结果见表1。

3.2线性范围评价按NCCLS的评价方案，选用购自sigma公司人胎盘a-L-岩藻糖苷酶为300U/L和20U/L的高低值酶样本2份，然后2份样本等量混合产生中间值160U/L，中间值再与高低值等量混合，产生230U/L和90U／L的5个不同梯度值样本，在仪器上以低值到高值和高值到低值分别测定，求得两次平均值，以X作为理论值，Y作为测定值进行回归分析，其方程Y=0.9945X+0.0453,r=0.9994。表明AFU活性在300U/L范围内，线性良好。

3.3比对实验取AFU浓度从10～200U/L的不同病人血清标本50份，用本试剂与进口试剂同时测定AFU活性,数据均按NCCLS文件统计，经t检验得P>0.05，y=0.9813X-0.3746;r=0.9991,表明本试剂与进口试剂高度相关。

3.4回收实验向250μl血清中加入50μl的生理盐水作为基础样本，测得AFU浓度为20U/L，向同体积的血清标本中分别加入50μl浓度为25U/L和80U/L的AFU酶标准品，使其终浓度分别为24.2U/L和33.3U/L的样本,每一浓度作平行管，测得其回收率为98.5％～102.4%。

3.5干扰试验在高、低两个浓度的混合血清样本中分别加入不同浓度的胆红素、血红蛋白、抗坏血酸（VitC），然合对AFU进行测定，结果表明三酰甘油≤5.0mmol/L、Hb≤2.5g/L、胆红素≤500μmol/L、VitC≤10g/L时经配对差异比较，均无显著干扰(P<0.05)。而常用抗凝剂中EDTA.K2、草酸钠对检测无显著干扰，但肝素明显干扰AFU的检测，使AFU结果出现假性偏高，其干扰机理尚不清楚。

4讨论

采用CNP-AFU底物法检测AFU活性是目前较为理想的方法，也是目前最先进的方法。该方法是在酸性条件下，样本中的AFU将含呈色基团的底物CNP-AFU的1，4位糖苷键水解，使反应在405nm处产生最大吸光度，通过测定吸光度的变化，即可计算出样本中AFU的活性。本文对浙江伊利康生物技术有限公司的该类方法的AFU检测试剂盒进行性能评价，其结果显示批内CV<2.2％，批间CV<2.4％。三酰甘油≤5.0mmol/L、Hb≤2.5g/L、胆红素≤500μmol/L、VitC≤10g/L时对结果无显著性干扰(P<0.05)；经与进口同类产品比对其结果高度相关，该试剂盒为液体试剂，使用方便、反应快速、结果准确，抗干扰能力强，适用于全自动生化分析。完全能满足临床检测要求。

参考文献

[1]杨昌国．线性评价和干扰实验中NCCLS评价方案的应用[J]．临床检验杂志，1999；17(3)：184

(收稿日期：2009.03.10)