油松成熟胚的不定芽诱导及植株再生试验

贺 娜 郑彩霞 周巧云

摘要以油松成熟种胚为材料，研究不同培养基、不同激素水平及光照条件对油松不定芽谤导的影响。结果表明：在光照培养条件下，诱导油松不定芽的最佳培养基为DCR+2.0mg／L 6-BA+0.1mg／LNAA，诱导率达到36％。幼苗在1／2DCR+0.1mg／LNAA+0.1mg／LIBA+0.1mg／L KT培养基上能生根并形成完整植株，诱导率达到25％。

关键词油松；成熟胚；不定芽；诱导；植株再生

中图分类号S791.254

文献标识码A

文章编号1007－5739(2009)16－0145－01

油松为我国特有树种，是我国华北、西北及东北南部的主要造林树种之一，同时也是世界上重要的木材及松脂生产资源。目前林业上主要依靠实生苗和优树嫁接的繁殖方法，繁殖系数低，苗木高低不一，林相参差不齐，远远不能满足生产的要求。而通过组织培养的方法不仅能为植树造林提供大量苗木，还能为遗传转化改良树种打下扎实的基础。目前关于油松组培成苗的报道非常少，主要存在增殖技术不成熟、生根难等问题。为此，现以油松成熟种子为材料，进行不定芽诱导与生根诱导条件的探索和优化，试图建立成熟的油松组织培养技术，为其苗木的无性繁殖提供依据。

1材料与方法

1.1试验材料

成熟油松种子，北京林业大学种子保存室提供。

1.2试验方法

1.2.1种子预处理。将成熟种子置于4℃冰箱冷藏放置30d。

1.2.2消毒和接种。在超净工作台上，将预处理过的成熟油松种子，用70％酒精浸泡30s，无菌水冲洗，然后置于2％NaClO溶液中3min，无菌水冲洗3～5min。将完整的种胚从种子中剥出，接种到培养基中。

1.2.3激素浓度与组成的筛选。将完整的胚接种于7种不同激素浓度和配比的DCR培养基中(表1)，并添加肌醇0.1g／L、蔗糖30.0g／L、琼脂6.0g／L，调pH值至5.8，4周后观察不定芽诱导情况。

1.2.4基本培养基的筛选。按参考文献H中的方法配制MS、SH、DCR 3种培养基，统计3种培养基中外植体的出芽率、生根诱导率及生长状况。

1.2.5生根诱导。以培养12周生长健壮的单芽为材料，分别接种到不同激素配比的1／2 DCR培养基中，研究不同激素浓度和配比对单芽生根的影响，4周后观察统计生根情况。

2结果与分析

2.1不同激素水平对油松不定芽诱导的影响

统计4周后各培养基中胚的愈伤率和出芽率(表2)。结果表明：2、3、5、6号培养基均有不定芽长出，但出芽率存在差异，其中2号培养基出芽率最高，达到36％。说明种胚的出芽率与培养基中6-BA和NAA浓度的比值有关。2号培养基中6-BA与NAA的浓度比为20:1，介于3号培养基(30:1)与6号培养基(15:1)之间。因此，适合丛生芽生长的培养基为：DCR+2.0mg／L 6-BA+0.1mg／L NAA。

从愈伤生成率来看，4号培养基诱导率最高，为26％。6号培养基诱导率最低，为12％。说明愈伤发生率也与6-BA和NAA的比值有关，比值越小，越利于愈伤的发生；比值越大，愈伤发生率越低。与细胞分裂素和生长素的比值越低，越有利于愈伤发生，比值越高，越有利于芽生长的结论是一致的。CK无愈伤发生，直接长出植株，分化芽能力差。

由此可见，油松不定芽的发生途径有2种：一是直接器官发生途径，直接从种胚上长出；二是从愈伤组织上再生不定芽的间接发生方式，对于油松不定芽的这种发生方式鲜见报道，相对于直接发生方式，其发生比率要低。且在培养过程中单芽切下后死亡的比例大。

2.2不同培养基对油松不定芽诱导的影响

将成熟种胚接种到与表1中2号培养基激素含量相同的MS与SH培养基中，4周后统计其不定芽的发生情况(表3)。结果表明：3种培养基中DCR培养基最有利于不定芽的发生，SH培养基不定芽发生率较低，而MS培养基效果最差。这一方面与种子自身营养物质的供应有关，另一方面可能与各个培养基中N元素的含量有关。MS的无机盐和离子浓度较高，不适合不定芽的发生。这一结果和云南松在MS培养基中诱导率较低，而在DCR培养基中较高具有相同性。

2.3生根诱导

以不添加激素的培养基上培养12周的健壮单芽为材料，接种到不同的1／2 DCR+激素的生根培养基中，4周后统计生根情况(表4)。结果表明：5种培养基中，只添加NAA或只添加NAA与IBA芽均未生根：加入TDZ虽也未生根，但单芽变得粗壮，针叶变宽，且有芽原基长出；而添加一定浓度的KT后有根长出。4周后观察，根长约1cm左右。粗壮，但根系不发达，所有植株均只有1条主根。继续培养4周，丰根长至2cm左右，且周围生出3～5条白色的毛细根，达到移栽要求，可以移栽。

3讨论与小结

激素水平和基本培养基类型都对不定芽的诱导有很大的影响。在DCR、MS、SH 3种基本培养基上，DCR的出芽率最高，SH效果次之。综上所述，油松种胚不定芽诱导的最佳培养基为：DCR+2 0mg／L 6-BA+0.1mR／L NAA。

激素水平对生根的诱导也有很大影响。生根培养效果较好的培养基配方是：1／2 DCR+0.1mg／L NAA+0.1mg／LIBA+0.1mg／LKT，生根率可以达到25％。由试验结果可知，芽的生根率偏低，根粗短，不利于移栽，有必要通过前期处理来提高芽的生根率。从整个试验过程来看，从芽诱导到生根需要20周，周期过长，需通过进一步的研究以缩短培养周期，满足生产需求。