多顺反子慢病毒载体介导编码基因在人胚胎干细胞中的表达

李　慧　李　威　王　倩　宋和存　郭　毅

摘要：人胚胎干细胞的基因修饰对于干细胞在体外的调控及促进干细胞在治疗方面的应用具有很高价值．探讨了以艾滋病病毒－1为基础的慢病毒栽体转导人胚胎干细胞，表达2种或3种转移基因的可行性和功效。应用脑心肌炎病毒的内部核糖体进入住点(IRES)序列和，或口蹄疫病毒(FMDV)裂解因子2A构建双顺反子和三顺反子慢病毒载体，绿色荧光蛋白(eGFP)和06-甲基鸟嘌呤－DNA．甲基转移酶作为检测基因．抗嘌呤基因(嘌呤－N－甲基转移酶；PAC)作为选择基因，转染人胚胎干细胞后经过嘌呤选择．通过流式细胞技术和蛋白印迹杂交方法检测eGFP和MGMT的表达．多基因慢病毒栽体可以同时将2或3个基因转移到人胚胎干细胞．多顺反子慢病毒栽体转导人胚胎干细胞后经过嘌呤选择，可以使转移基因高效、均匀的表达。在人胚胎干细胞的基础和应用研究方面具有重要意义。