香蕉红素氧还蛋白酵母双杂交cDNA文库的构建及鉴定

程　萍　冯仁军　袁克华　张银东

摘要：结合改良的BD SMART^TMPCR cDNA Synthesis Kit User Manual cDNA合成试剂盒，反转录合成带有目的接头cDNA第一链，通过LD-PCR，扩增双链cDNA(ds cDNA)，产物经双酶切后回收，与经同样双酶切的酵母双杂交系统中pGADT7载体连接转化，并进行了鉴定，结果表明：提取的RAN的A₂₆₀，A₂₈₀=1.82，表明所提RNA纯度高；双链cDNA文库大于0.2kb，且弥散较长，成瀑布条带状；根据生长菌落计数，文库含有1.2×10⁶转化子，重组子不同插入片段在0.3～2kb之间，表明该文库达到建库要求，为下一步进行酵母双杂交试验奠定基础，此方法用于构建cDNA文库与酵母双杂交系统相结合的研究目前尚未见过相关报道。

关键词：香蕉红素氧还蛋白；SMART法；cDNA文库；酵母双杂交

中图分类号：S668.1文献标识码：A文章编号：1007－7847(2009)04－0349－05