高效液相色谱法测定新止咳合剂中甘草苷的含量

　　摘要；目的：建立高效液相色谱法测定新止咳合剂中甘草苷的含量。方法：采用Dikma钻石C色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)；流动相为乙睛-0.5％冰醋酸溶液(20：80)；检测波长为276nm，流速为1.0ml/min，柱温为30℃。结果：甘草苷进样量在0.02～1.0μg(r=O.99990)范围内与峰面积线性关系良好，平均加样回收率为99.27％，RSD=0.67％(n=9)。结论：本法简便、快速、专属性强、重现性好；可作为新止咳合剂的质量控制方法。
　　关键词：甘草苷；高效液相色谱法；新止咳合剂；含量测定
　　中图分类号：R927.2
　　文献标识码：A
　　文章编号：1007-2349(2008)02-0035-02
　　
　　新止咳合剂由桔梗、陈皮、儿茶、甘草、法半夏等药制成，具有止咳、祛痰的功效。为本院的医疗机构制剂。质量标准中没有规定含量测定方法。本文参考《中国药典》2005年版，采用HPLC法测定甘草的主要成分——甘草苷的含量，作为质量控制指标，获得满意的结果，现报道如下。
　　
　　1、仪器与药品
　　
　　高效液相色谱仪(美国Agilent 1100系列仪)，包括自动进样装置、VWD可变紫外检测器、柱温箱等；METTLERAE240型电子分析天平。除高效液相色谱检测所用试剂为色谱纯外，其他试剂均为分析纯。甘草苷对照品(批号为111610-200604，供含量测定用，中国药品生物制品检定所)；新止咳合剂(由本院制剂室配制，批号：20070206、20070403、20070428)。
　　
　　2、方法与结果
　　
　　2、1色谱条件
　　色谱柱：Dikma钻石C柱(4.6mm×250mm，5μm)；流动相：乙睛-0.5％冰醋酸(20：80)；流速：1.0ml/min；柱温：30℃；检测波长：276nm；进样量：10μl。理论板数按甘草苷峰计算为7000。
　　
　　2、2溶液的制备
　　精密称取甘草苷对照品(置五氧化二磷为干燥剂的干燥器中，减压干燥36h)10.08mg，置于20ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得每lml中含甘草苷0.504mg的溶液(贮备液)，分别精密吸取溶液(贮备液)①0.1ml、②0.3ml、③0.5ml、④1ml、⑤3ml、⑥5ml；分别置于25ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，分别得每1ml含①2.016μg，②6.048μg，③10.08μg，④20.16μg，⑤60.48μg，⑥100.8μg的对照品溶液。
　　取新止咳合剂10ml，用乙酸乙酯提取5次(20、20、10、10、10ml)，合并乙酸乙酯层，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至25ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，混匀，用0.45μm的微孔滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液。
　　
　　2、3方法学考察
　　2、3、1标准曲线和线性范围　 精密吸取甘草苷对照品溶液①、②、③、④、⑤、⑥各10μl，分别注入高效液相色谱仪测定。以甘草苷对照品含量(μg)为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，直线几乎通过原点，所以采用外标一点法进行含量测定。线性回归方程为y=1541.84x+13.19737，r=0.99990，线性范围为0.02～1.0μg。
　　2、3、2精密度试验
　　取同一甘草苷对照品溶液④10μl，注入液相色谱仪，连续测定6次，结果峰面积积分值分别为：324.6